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什麽是暗視野顯微鏡?可以看見多小的細胞?

2013-10-16  發布者:admin 

暗視野顯微鏡(dark field microscope)是光學顯微鏡的一種,也叫超顯微鏡ultramicroscope )。暗視野顯微鏡(dark field microscope)的聚光鏡中央有擋光片,使照明光線不直接進人物鏡,隻允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡,因而視野的背景是黑的,物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4~200nm的微粒子,分辨率可比普通顯微鏡高50倍。

原理

鉤端螺旋體(暗視野映光法)

鉤端螺旋體(暗視野映光法)

 

暗視野顯微鏡是利用丁達爾(Tyndall)光學效應的原理,在普通光學顯微鏡的結構基礎上改造而成的。暗視野聚光器,使光源的中央光束被阻擋。不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光改變途徑,傾斜地照射在觀察的標本上,標本遇光發生反射或散射,散射的光線投入物鏡內, 因而整個視野是黑暗的。   

暗視野顯微鏡的基本原理是丁達爾效應。當一束光線透過黑暗的房間,從垂直於入射光的方向可以觀察到空氣裏出現的一條光亮的灰塵通路”,這種現象即丁達爾效應。暗視野顯微鏡在普通的光學顯微鏡上換裝暗視野聚光鏡後,由於該聚光器內部拋物麵結構的遮擋,照射在待檢物體表麵的光線不能直接進入物鏡和目鏡,僅散射光能通過,因而視野是黑暗的。暗視野顯微鏡由於不將透明光射入直接觀察係統,無物體時,視野暗黑,不可能觀察到任何物體;當有物體時,以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體,照明光大部分被折回,由於物體(標本)所在的位置結構,厚度不同,光的散射性,折光等都有很大的變化。 

 

結構與改裝

  暗視野顯微鏡基本結構是將普通顯微鏡光學組加上擋光片。普通顯微鏡隻要聚光器是可以拆卸的,支架的口徑適於安裝暗視野聚光器,即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時,可用厚黑紙片製作一個中央遮光板,放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上,也能得到暗視野效果。擋光片是用來擋住光源中間的光線,讓光線隻能從周圍射入標本,大小約和光圈大小相同。不同倍率用不同的光圈,所以要製作不同的擋光片。 

 

實際應用

  

暗視野顯微鏡常用來觀察未染色的透明樣品。這些樣品因為具有和周圍環境相似的折射率,不易在一般明視野之下看的清楚,於是利用暗視野提高樣品本身與背景之間的對比。這種顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子,隻能看到物體的存在、運動和表麵特征,不能辨清物體的細微結構。臨床上,暗視野顯微鏡常用於檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查,對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。 



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