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尼康顯微鏡:熒光激發塊的分類

2013-10-16  發布者:admin 

落射熒光的幹擾和吸收濾色鏡組合被安置在濾色鏡立方體(或光學塊),並包括激發濾光片,二色性分束器(通常稱為反光鏡),和光柵(或發射)的濾色鏡,如在圖1中示出(一)。使用本指南中選擇適當的濾色鏡設置為廣角熒光顯微鏡調查所用的發色團的激發和發射光譜特性相匹配。作為一個例子,圖1b)給出一個典型的高性能帶通發射藍光激發濾色鏡組合的光譜。尼康熒光濾光器組合中所提供窄,中,寬的通帶激發版本與相應的發射濾色鏡可與任何帶通或長波光譜特性。

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紫外線激發 -尼康紫外線激發熒光濾色鏡組合包括四個仔細平衡的組合,包含著帶通或長波發射(光柵濾色鏡能夠選擇性地隔離通過一個窄或寬的區域,藍色,綠色和紅色可見光的熒光波長的光。這些濾色鏡的組合涵蓋的激發波長範圍在330380納米的帶通帶寬度公司1040,和50納米之間。三組合采用相同的二色鏡,而第四套有一個反射鏡具有較低的切配合其較窄的激發帶的波長。紫外線濾色鏡集包含長通或單通發射濾波器。

 

激發 -尼康紫激發熒光濾色鏡係列包括三種組合包含任帶通或長波輻射(光柵濾色鏡能夠通過一個窄或寬的區域,藍色,綠色和紅色的波長選擇性地隔離熒光。這些組合覆蓋的激發波長範圍在379-420納米的帶通寬度的檔案1022,和40納米之間。了兩種組合采用相同的二色鏡,而第三組有較低的波長截止,而其更短的波長的激發帶重合的鏡像。

 

藍紫激發 -尼康藍紫激發熒光濾色鏡組合包括四個組合,其中包括無論是帶通或長波發射濾波器(光柵)能夠選擇性地隔離通過一個窄或寬的區域,青色,綠色熒光,紅色波長。這些互補濾波器組涵蓋激發波長介於400-446納米帶通寬度型材1020,和40納米。三組合采用相同的二色鏡,而第四組具有較高的波長上(5納米)切斷,以符合其的其他組件具有鏡麵。

 

藍色激發 -尼康藍色激發熒光濾波器補充包括六個平衡組合,包含著帶通或長波輻射(光柵濾色鏡能夠選擇性地隔離通過一個窄或寬的頻帶的綠色,黃色,紅色熒光,和近紅外光譜區域。這些濾色鏡組覆蓋的激發波長範圍在420495納米的帶通寬度的檔案203040,和70納米之間。五組合采用相同的雙色鏡,,而第六集切斷較低的波長上增加采集的信號有一個鏡子。尼康藍色激發濾光片組合的帶通濾波器阻隔濾色鏡都有譜寬為40納米。其中一個濾色鏡B-3A)被設計為可以采用鎢鹵素燈照明。

 

綠色激發 -尼康綠色激發熒光濾色鏡組合係列包括6塊無論是單通或長波發射(光柵濾色鏡能夠選擇性地隔離熒光黃色窄或寬的頻帶內,橙色,紅色和近紅外光譜區域。這些濾色鏡的組合包括510560納米的帶通帶寬度公司102530,和50納米(窄,中,寬激發帶)的激發波長之間的範圍。三組合采用相同的二色鏡(565納米),而其他三個波長具有較高的切割值(570575納米)上的反射鏡。兩個六尼康綠色激發濾光片設置結合帶通光柵帶寬的6075納米的濾色鏡

 

黃色激發 -黃色激發熒光濾色鏡從尼康組合包括兩個平衡集單帶通濾波器(光柵)能夠選擇性地隔離熒光的橙紅色光譜區域內。這些互補的濾色鏡組合包括與通帶的寬度在4055納米的532587納米的激發波長範圍內。這兩種組合使用相同的長通雙色鏡(595納米切)。兩個尼康黃色激發濾光片設置納入通光柵濾色鏡帶寬為6075納米..

 

激發 -尼康紅色激發熒光濾色鏡組合類別包括單塊集成了一個帶通濾色鏡能夠選擇性地隔離發生在深紅色熒光近紅外光譜區的發射(光柵)。在700納米的阻擋濾波器的通帶的中心,與帶寬為75納米(663738納米)。60納米寬的激發帶,包括橙色和紅色波長涵蓋590650納米的光譜範圍。Cy5的的HYQ組合采用了長通雙色鏡,具有波長為660納米,這是高於10納米的激發帶通截止的切口。

 

黃色熒光蛋白(YFP激發 -尼康黃色熒光蛋白的熒光濾色鏡類包括一個單一的高性能均衡的組合,有效地延長了熒光蛋白檢測波長較長的增強型綠色熒光蛋白(GFP)的濾色鏡設置所提供的功能黃色色變異的GFPYFP EYFP)的。YFP HYQ濾色鏡組合采用相對較窄的通帶的激發和發射(光柵)濾波器,其目的是為了符合特定的光譜特性的增強型黃色熒光蛋白,使熒光從YFP衍生物排放分別評估其他熒光蛋白質。

 

雙頻激發 -尼康雙波段熒光濾色鏡組合包括三個仔細平衡的組合,包含雙通的激發和發射濾波器(光柵),被納入一個單一的元素,能夠選擇性地隔離同時從兩個熒光基團的熒光。濾色鏡組中的每一個是與特定的熒光染料對為獲得最佳性能而設計的,盡管它們與具有類似的吸收光譜和發射光譜的熒光探針的替代對同樣有效。利用精確的波段選擇,陡峭的帶通反射和透射區域,多激發和發射信號之間的轉換是分開以最小的交叉幹擾。

 

三頻激發 -三的激發帶熒光尼康提供的濾色鏡包括兩個平衡塊包含三重通激發和發射(光柵濾色鏡能夠選擇性地隔離同時從三個熒光團的熒光發射。每一個濾色鏡組是專為最佳性能具有特定的的三個熒光染料,雖然他們是同樣有效的與的備用探頭組合具有類似的吸收光譜和發射光譜。利用精確的波段選擇,與陡峭的帶通反射和透射區域,多激發和發射信號之間的轉換是分開的與最小interference.三立方體。

 

HYQ立方體 - HYQ尼康熒光濾色鏡組合組包括四個仔細平衡高性能集,其中包括帶通發射濾波器(光柵)在有限的選擇性分離熒光波長範圍。每個HYQ濾色鏡設置的命名反映了熒光染料的名稱,它主要是設計,但在其各自的激發範圍之內,可應用的每一種組合的各種適當的熒光染料。

 

尼康熒光濾光片設置總表

尼康所采用的濾色鏡的命名源於條款可以追溯到20世紀90年代初的混合物。當時,所有的尼康互補濾波器組合使用硬塗層濺射技術,但許多目前可用的濾色鏡利用新型柔軟的塗層方法生產。雖然軟大衣更容易受到濕度和熱降解,且必須更仔細地處理比硬塗層濾色鏡,他們表現出更高的阻擋光密度值,,微調特定波長頻帶,並提供更大的方便。了解尼康濾色鏡組合代碼命名規則提供了一種機製,迅速 ​​確定是否特定的一組特定的熒光將充分履行。

 

尼康專有的字母數字濾波器的指定代碼的第一個字母表示的波長的激發光譜區域(例如,UVVB,和g,這是簡單的縮寫紫外線,紫色,藍色,綠色,分別)。激發後的代碼的數量涉及激發濾波器的通帶的寬度:1中和寬的頻帶激發的窄頻帶激發2,和3很寬的頻帶激發。最後,一個或多個字母的激發帶通大小號碼標識的光柵濾色鏡的特點。代碼字母à表示一個標準的長通光柵濾色鏡以最低的截止波長,而指定較高的臨界波長值一個長波發射濾波器的。帶通發射濾波器中帶有字母的ê(指增強),表明其優越的性能方麵,以消除交叉。E / C濾波器是柔軟的毛發幹擾組合設計特異性探針,如DAPIFITCTRITC,州和得克薩斯州紅獲得最佳性能。

 

紫外光激發

UV-2E / C - UV-2E / C濾波器組合設計作為一個尖銳的紫外熒光截止濾波器塊。濾色鏡是用於產生高信/噪比的軟塗層類型。利用此組合的窄帶帶通光柵濾色鏡的設計顯著地減少或完全消除綠色和紅色的可見光的波長。

UV-1A - UV-1A組合被設計成具有窄的激發帶通(隻利用的汞光譜線)和二色鏡的通帶窄,最大限度地減少自體熒光和光漂白的一個濾色鏡塊,用於紫外熒光。

UV-2A - UV-2A濾色鏡的組合被設計成一個標準的濾色鏡塊,用於紫外熒光是最亮的紫外線濾色鏡,設置在Nikon調色板。

UV-2B - UV-2B組合被設計作為一個通用的濾色鏡塊,提供更暗的背景和更好的對比度比UV-2A濾色鏡的組合的紫外熒光。

 

激發

V-1A - V-1A濾色鏡的組合被設計作為一個濾色鏡塊具有窄的帶通區域,以減少自發熒光的紫色熒光激發。長通的排放濾色鏡,可檢測的熒光染料的波長範圍很廣。

V-2A - V-2A組合作為一個標準的紫色熒光濾色鏡塊具有最大程度的通用性而設計的。隨著介質的激發帶通和長波發射濾波器,產生的圖像是最亮的尼康紫濾波器組。

藍色熒光蛋白(BFP -BFP濾波器塊結合了一個狹窄的激發帶,發射用一個帶通濾波器限製自體熒光,以及排除來自紅色和綠色的熒光團的發射檢測。這種濾色鏡的組合,是優秀的成像藍色熒光蛋白的衍生物。

 

藍紫激發

BV-1A - BV-1A濾色鏡的組合被設計作為一個濾色鏡塊的藍紫色熒光激發具有很窄的帶寬,以盡量減少試樣的自體熒光。長通的排放濾色鏡,可檢測的熒光染料的波長範圍很廣。

BV-2A - BV-2A組合設計為標準的藍紫色熒光濾塊。隨著中激發濾光片帶通和長波發射濾波器,產生的圖像與這個組合是最亮的尼康藍紫濾波器組。

BV-2B - BV-2B組合被設計成藍紫色熒光的濾色鏡塊,提供了一個比較暗的背景色和更高的對比度比標準的BV-2A濾色鏡的組合。

CFP(青色熒光蛋白) - CFP濾波器模塊結合了激發帶寬窄通發射濾波器來限製以及自發熒光排除檢測紅,黃,和許多綠色發光的熒光染料。

 

藍光激發

B-1A - B-1A濾波器組合設計與窄激發通帶,以減少自體熒光漂白。阻的長通濾波器(發射)是能夠發送信號,從綠色,黃色,橙色和紅色的熒光基團,具有顯著的吸收在上部藍色波長區域對應的激發帶通窗口。

B-2A - B-2A濾色鏡組合尼康藍光激發組是標準的濾色鏡設置。它的設計采用了寬激發帶通相比,B-1A結合的熒光團,以提供一個擴大的吸收窗口的設置也有較低的二色鏡和阻擋濾波器的波長,產生增強的圖像的亮度相比,-1A濾色鏡設置。

B-3A - B-3A濾色鏡的組合使用的相同的二色鏡和長通發射濾波器作為B-1A集,但采用了一個很寬的激發帶,使得它適用於鎢鹵素燈照明。這種結合可實現的一個顯著量的從綠色,黃色,橙色和紅色的熒光基團,在藍色波長區域具有吸收帶的信號的傳輸。

B-1E - B-1E濾色鏡的組合的三組中的藍色熒光激發係列,利用帶通,而不是長波通,阻擋濾色鏡的主要區別在激發帶的寬度。阻帶通濾波器組中的每一個提供的性能適用於標記的異硫氰酸熒光素(FITC)(綠色發光)的成像標本,而阻擋黃色,橙色,紅色發射。B-1E組合使用一個窄帶的帶通激發濾光片結合帶通發射濾波器(阻擋)。

B-2E - B-2E濾色鏡的組合,采用了廣泛的激發帶通,延伸20納米的低波長比激發帶的B-1E集。二色鏡和帶通光柵濾色鏡的規格是相同的B-1EB-2E濾波器組合。

B-2E / C - B-2E / C濾色鏡的組合采用一個中等寬度的激發帶,連同一個稍微降低的發射帶通波長區域相比,B-1EB-2E集。的性能進行了優化,同時提供改進的排除黃色到紅色的波長檢測多個標記實驗中流行使用的熒光團的數量。

 

綠色激發

G-1A - 綠色波長激發G-1A濾波器組合是一個狹窄的激發帶通設計,以減少自體熒光,並盡量減少試樣的輻射暴露。阻的長通濾波器(發射)是能夠發送信號,從黃色,橙色,紅色發光的熒光基團,在中央的綠色波長區域中有顯著的吸收。

G-1B - G-1B濾色鏡組合也有類似的G-1A集組件配置文件,將狹窄的激發帶通,以減少自體熒光和試件破壞,但不同的雙色鏡和發射濾波器切斷波長。上較長的波長的發射濾波器的移位產生的圖像顯示偏紅由於增加阻塞的黃色發射。

G-2A - G-2A濾色鏡組合配置為標準的綠色濾色鏡塊,具有廣泛的應用到綠色波長激活了大量的熒光團激發通帶。長波發射濾波器允許檢測的所有熒光波長較長的比黃色的光譜區域。

G-2B - G-2B濾色鏡組合設計作為G-2A濾波器塊具有相同的激發特性。然而,更高的雙色鏡和發射濾波器截止波長,G-2B組產生的圖像具有較深的背景和顏色移朝紅。

G-2E / C - G-2E / C濾波器組合設計多個標記實驗中所使用的一些流行的熒光探針具有最佳的性能。一條狹窄的激發帶通提供選擇性激發,而帶通發射濾波器減少幹擾發射紅光和近紅外熒光團。

CY3 HYQ - Cy3綠色激發濾光片組合配置類似G-2E / C組。然而,具有更廣泛的激發通帶和寬的發射帶通,包括較低的波長,通過Cy3標記的濾色鏡塊,產生的圖像是明亮一些反映更黃的光譜區域發射的檢測。

 

激發

Y-2E / C - Y-2E / C濾色鏡的組合為黃色波長激發的設計作為一個專業的濾色鏡設置為使用與得克薩斯紅和CY3.5,雖然激發帶寬跨越黃色波長(重疊的部分綠色區域),設定可以利用與其他熒光染料的範圍。阻帶通濾波器的傳輸信號從橙色和橙紅色發光的熒光基團,同時消除最紅和近紅外發射。

德克薩斯紅HYQ - 德克薩斯紅HYQ濾色鏡組合Y-2E / C組也有類似的零件外形,而是更廣泛的激發和發射帶通窗口,允許它來傳輸更多的能量,並產生較亮的圖像。由此產生的圖像也反映了額外的紅色熒光信號,由於紅色光譜區域中的較長的波長的發射濾波器的通帶的延伸。

 

激發

Cy5HYQ - Cy5HYQ紅色波長激發的濾色鏡的組合的目的是提供高能量的激發的熒光Cy5標記的寬的激發範圍(黃-橙色〜紅色),雖然可以設置為使用多種熒光染料。陡峭的濾波器的反射和透射區之間的轉換使能維持在與高亮度電平的寬通帶的使用產生的組合信號分離。阻帶通濾波器的傳輸信號從遠紅外到近紅外的波長範圍內是最有效的使用的紅外濾色鏡的電子探測器,如光電倍增管和CCD相機沒有檢測到。

 

雙頻激發

DAPI-FITC - DAPI-FITC濾色鏡的組合被設計成用於同時檢測排放物熒光染料DAPIFITC,或其他的熒光探針具有相似的光譜特征的配對。雙窄的激發和發射頻段對應相應的藍色發射,耦合到綠色發光的藍色激發紫光激發特定區域。

FITC-TRITC - FITC-TRITC濾波器的組合是專為同時檢測熒光染料FITCTRITC,或探頭對光譜相似排放。激發和發射濾光片帶通濾波器允許兩個信號通道,一個藍色的激發和綠色發射對應於特定的窄的區域,另一個綠色的激發和發射橙紅色。

FITC-德克薩斯紅 - FITC-德克薩斯紅濾色鏡的組合的設計相比,具有稍微不同的帶通區域為藍色的激發和綠色發射的FITC-TRITC集,以便更有效地激發FITC。這些變化符合稍高的波長範圍為得克薩斯紅色(綠色激發紅光發射)頻段。多個帶通區域提供最佳的檢測,以最小的串擾,同時FITC和得克薩斯州紅或熒光光譜相似對可視化。

 

三頻激發

DAPI-FITCTRITC - DAPI-FITC-TRITC濾色鏡的組合被設計成用於同時檢測排放物的熒光染料DAPIFITCTRITC或其他具有相似的光譜特性的探針的組合,。三個狹窄的激發和發射頻段對應相應的藍色發射,耦合到綠色發光的藍色光激發下,綠橙紅色發射激發紫光激發特定區域。

DAPI-FITC-得克薩斯紅 - DAPI-FITC得克薩斯紅濾色鏡的組合設計紫羅蘭激發稍微不同的通帶區域-藍色的發光,藍色激發-綠光發射,當較標準組DAPI-FITCTRITC。該設計的目的是,以更好地符合具有較高的激發和發射波長所需的德克薩斯紅,相對值TRITC。多個帶通區域提供最佳的檢測,以最小的交叉和噪聲,同時可視化的DAPIFITC,和得克薩斯紅或熒光光譜相似組合。

 

HYQ濾色鏡組合

TRITC HYQ - TRITC的的HYQ濾色鏡組合綠色波長激發TRITCDII如熒光染料,以提高性能。一些綠色激發載通常使用在本申請中,擴大激發通帶紅移的二色鏡切向這些熒光團的較高的信號電平,並允許改進的檢測紅色熒光蛋白的熒光蛋白變體和遠紅熒光的比較蛋白HcRed

 

CY3 HYQ - Cy3HYQ綠色激發濾光片組合的G-2E / C組也有類似的零件外形,雖然它產生了更多的激發和發射能量,通過擴大通帶窗戶。此外,發射通帶延伸到較低的波長(入黃),從而在兩個明亮的圖像和黃橙色的色調偏向。這是推薦的濾色鏡的組合,用於檢測的花青Cy3標記的熒光探針,尤其是在多標簽技術,它減少從遠紅光和近紅外熒光團發射的幹擾。

 

得克薩斯紅HYQ - 得克薩斯紅HYQ濾色鏡組合使用的熒光探針得克薩斯紅色和CY3.5優化,具有更廣泛的激發和發射通帶比同類Y-2E / C組。由於由此產生的更高的信號電平,發射通帶向長波長延伸,相對於Y-2E / C設定,這樣的組合產生更明亮,更偏紅色調的圖像。得克薩斯紅的HYQ組合提供改進的性能超出了上限的Y-2E / C發射帶波長發射的探針,同時限製在深紅光和近紅外熒光團發射的幹擾。

 

Cy5HYQ - CY5 HYQ濾色鏡組合是唯一的尼康專為高能量的紅色波長的激發,雖然使用熒光Cy5的優化,寬闊的橙黃色,紅色的激發範圍是適合采用各種應用熒光染料。產生的熒光在遠紅外到近紅外波長的發射濾波器的通帶相對應的,主要是對人眼不可見的,最有效的檢測需要使用的光電倍增管或CCD攝像機。寬帶通濾波器的地區,加上陡峭的剪切和切斷過渡,保持最大的信號分離和信號噪聲比,HYQ濾波器係列的特點。

 

熒光蛋白濾色鏡組合

賦予GFP長波發射(FGPR-LP - 賦予GFP長波發射濾色鏡的組合,是一種長通版本賦予GFP帶通濾波器的設置和設計賦予杜克大學博士Sharyn的。此濾色鏡的設置是非常有用的用於熒光的研究利用wtGFPEGFP。隨著這個係列的其他濾色鏡,集設計,增加二次熒光強度(亮度)沒有相應增加噪音水平。通帶越陡,所建立的幹擾腔的數目增加的激發和發射濾光片,允許濾波器的光譜之間的接近。由此產生更廣泛和更陡濾色鏡光譜允許的設置,以提供更多的激發和捕獲更多的熒光強度。

 

賦予GFP帶通發射(FGPR-BP - 賦予GFP帶通發射(FGPR-BP濾色鏡組合是一個帶通版本賦予GFP長通濾光片設置Sharyn博士設計賦予杜克大學。此濾色鏡設置為利用wtGFPEGFP的熒光研究是有用的,是分布最廣的GFP濾色鏡集。

 

活塞GFP帶通發射 - 活塞GFP帶通發射濾色鏡組合是範德比爾特大學博士大衛活塞設計一個帶通濾波器。發射濾波器具有窄帶通,是有用的,同時避免超過540納米波長的自發熒光定量EGFP賦予綠色熒光蛋白的熒光。

 

黃色熒光蛋白帶通發射(YFP HYQ -尼康黃色熒光蛋白YFP HYQ濾色鏡集設計,在一條狹窄的(20納米)波長在藍綠光譜區域中帶傳輸激發照明,再加上綠色,黃色發射檢測30納米通區域內。該塊是優化成像YFP,青色熒光蛋白的雙染色技術,同時保持歧視。



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