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新聞資訊

徠卡顯微鏡,激光顯微切割(LMD)和花式應用

2013-12-12  發布者:admin 

新的和深遠的應用最近已開辟了激光顯微切割領域。除了常規的解剖,徠卡激光顯微切割係統(LMD)是一個很好的工具,標記相關的結構,提供非常具體的激光操控選定的區域。 這種激光打標功能的應用,如CLEM,NanoSIMS以及在活細胞扇區是有用的。 下麵簡要概述顯示了如何這樣複雜的挑戰可與LMD組合來掌握。

CLEM(相關光學和電子顯微鏡)和LMD - 標結構的快速和精確追蹤

越來越多的蛋白質和細胞器研究在細胞生物學的複雜性,有時需要不同的成像方法的組合。 部分CLEM方法尤其夫婦技術,如光學和電子顯微鏡。 的主要目的是顯示用光學顯微鏡在電子顯微鏡水平,即在活細胞的動態活動與超微結構和三維信息的相關獲得的圖像。 使用LMD中,參考坐標係統可以產生一個培養基材樣品製備過程中,使標記的細節快速和精確的位置的表麵上。 這個過程是在圖1所示的令人印象深刻。

圖。 1:參考網格壓印到細胞培養基材。 (一)參考網格的激光顯微切割顯微鏡的計劃。 該圖案化基板ACLAR用激發濾波器BP三十零分之五百四十五(B)的落射熒光顯微鏡下成像,BP四十零分之四百八十○(C)和BP四十分之三百六十〇(D)。 電網熒光比標簽蛋白的GFP信號非常微弱。(E)參考網格是可見的明場和用掃描電子顯微鏡(F)。 (G-I)由於ACLAR的融化,正麵和負麵的圖案被印如通過掃描EM(G)。 因此,聚合,除去培養劑(H)後,該模式將顯示為陰性和陽性痕跡留下明顯漏洞(我)在第一個EM的部分。 (J)的圖片的預規則化襯底安裝到金的鍍活細胞的載體

 

NanoSIMS - 結構在第三維

使用NanoSIMS(納米二次離子質譜法),加上LMD和AFM(原子力顯微鏡)來獲得元件和一個空間分辨率<50nm的樣品的同位素組成的一個三維圖像進行細菌分析。 的LMD方法證明是有利這裏,也:激光產生的過濾器的表麵上的網格圖形中使用,以標記感興趣的結構(圖2)。 此方法用於在海洋生物學,例如,分析碳和氮固定在太平洋和波羅的海

圖。 2:用激光顯微切割(LMD)體係催化記者沉積(CARD)-FISH和納米尺度的二次離子質譜(NanoSIMS)篩選標記分析了相同的過濾器位置。 小盒子圖為13 C-結合細胞(紅色)的NanoSIMS圖像疊加在古菌為細胞的檢測CARD-FISH圖像。 每個網格的大小是大約50×50微米的帶標記的LMD係統

 

LMD在活細胞研究 - 為“蓄意破壞”的方法

徠卡LMD也是在活細胞領域的蜂窩結構,如中心體,微管和膜的蓄意破壞機械特別有用。 例如,細胞膜,可以用激光穿孔,以允許先前完全由膜堵塞的物質的滲透,根據教授 莫妮卡總得從遺傳醫學和日內瓦大學發展部。 最重要的是,它可以在細胞分裂過程(圖3)來操縱細胞的主軸裝置。

圖。 3:有絲分裂紡錘體消融在野生型單細胞胚胎。 一個C。 線蟲 1 -細胞胚胎表達α-微管蛋白融合到綠色熒光蛋白。 有絲分裂紡錘體剛剛之前(a)和激光燒蝕(b)之後。 這兩個紡錘體兩極消融後分離



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