設為首頁 | 添加收藏 |sitemap |百度地圖 |
貨真價實 坦誠無欺
新聞資訊

尼康顯微鏡,有效的放大倍率

2014-02-19  發布者:admin 

 以觀察細標本細節在光學顯微鏡下,存在的微小的功能必須有足夠的對比度和投影中間圖像間的角度是稍微大於人眼的角度分辨能力大。 在選定的數值孔徑,在顯微鏡提供的放大圖像,其具有大小等於人眼的分辨率極限,超過該點附加放大率不會導致甚至更小的樣品細節的分辨率。

有效的倍率為物鏡/目鏡組合的範圍是由顯微鏡光學係統的數值孔徑來定義。 有得到解決必要的細節的最小放大率存在的圖像,並且該值通常相當任意設置為500倍,數值孔徑(500×NA)和由下式定義

有效的放大倍率(總)= 500〜1000×NA(物鏡)

在光譜的另一端,一個圖像的最大有效倍率通常設定為1000倍,數值孔徑(1000×NA)作為由上麵的方程。 倍率高於此值會產生沒有進一步的有效信息或圖像細節更精細的分辨率,通常會導致圖像質量下降。 表1編錄在於有效的放大倍率範圍內的共同物鏡/目鏡組合。

有效的放大倍率範圍(500-1000×NA的物鏡)

物鏡 目鏡
(不適用) 10倍 12.5倍 15倍 20倍 25X
2.5X
(0.08)
--- --- --- x x
4X 
(0.12)
--- --- x x x
10X 
(0.35)
--- x x x x
20X 
(0.55)
x x x x x
40X 
(0.70)
x x x x ---
60X 
(0.95)
x x x --- ---
100X 
(1.42)
x x --- --- ---
表1

超有效的放大倍率的限製使圖像從空放大的現象受苦(圖1(b)所示),其中通過目鏡或中間管鏡頭放大倍率增加僅使圖像變得更加放大,在沒有相應增加詳細解析。 與此相反,在圖1中所示的圖像(a)的使用正確的物鏡和目鏡組合有效地利用數值孔徑,以實現最佳的分辨率捕獲。

事實上,過度的放大倍率介紹文物,衍射界限,暈到圖像的模糊的標本特征和​​複雜的視覺觀察的解釋。 顯微鏡觀察結果也受人眼的亮度和色溫的照明的,觀察者的年齡,在眼浮子的存在下的敏感性,以及眼睛是否休息或疲勞。

對於目視觀察,將試樣微細結構的圖像,必須以一定角度比人眼的分辨能力稍大觀看。 用具有良好照明的顯微鏡,在以250毫米參考可視距離觀察的標本2解析點之間的距離為約0.15毫米,對應於約2分鍾弧的視覺敏銳度的角度。 這個極限角是由在視網膜視覺元素,這是間隔約5微米的間隔的間隔距離的限製。

要與眼睛和物鏡的解析力分辨率的限製,在試樣兩個緊密間隔的點可以考慮。 如果這兩個點駐留在物鏡的分辨能力的限製,則

r (separation distance) = λ/2NA

其中,r是間隔的兩個點的距離,λ是照明的波長,NA是物鏡的數值孔徑。 以放大的距離,直到試樣點出現在眼睛在0.15毫米(占2分鍾弧)的分離距離,AG亚游集团研究的關係

0.15 mm = M × λ/2NA

它可以重新安排到:

M = (2NA × 0.15)/λ

其中M是最佳的顯微鏡放大倍數。 當照射波長被認為在於,在可見光光譜(550納米或0.00055毫米)的綠色區域,就可以代入公式

M = (NA × 0.30)/0.00055) = (approximately) 500 × NA

結果為最小倍率為目視觀察細間距的標本細節,這是大約500倍的物鏡的數值孔徑的。 這樣的討論適用於具有中等對比度的標本,但隨著更高的對比度試樣的兩個點可以被具有更高的放大倍率來解決,即使它們彼此靠近。 在實踐中,放大倍率從有效的放大倍率範圍大大偏離通常采用。 例如,非常低的放大倍數(1倍至4倍)經常被用來地形地圖的標本(如組織學染色的細節),在此寬視場是可取的,以便迅速注意所有可用樣本的特性。 在許多情況下,2.5倍物鏡也可以組合具有寬視野目鏡在10倍的放大倍率,以揭示其直徑為8毫米或更大的麵積。

在高放大倍率,有效的倍率的限製,有時超過為了更舒適地觀看圖像。 這通常是在小顆粒或生物觀察並計數在非常高的數值孔徑和放大倍數的情況。 然後犧牲清晰度在試樣細節,這通常不與所述圖像的定量分析產生幹擾。

應注意在選擇目鏡/物鏡的組合,以確保標本細節的最佳放大倍率不增加不必要的文物。 例如,為了達到250倍的放大倍率,則顯微鏡可以選擇一個25倍目鏡耦合到10倍的物鏡。 對於相同的放大倍率另一種選擇將是一個10倍的目鏡用25倍的物鏡。 因為25倍物鏡具有更高數值孔徑(約0.65)並不比10倍的物鏡(約0.2​​5),並考慮到數值孔徑值定義一個物鏡的分辨率,很明顯,後者的選擇將是最好的。 如果相同的視場的顯微照片分別與上述各物鏡/目鏡組合製成,這將是明顯的是,10倍目鏡/25x物鏡哆將產生的顯微照片是擅長在樣品的細節和清晰度相比,變體的組合。



滬公網安備 31011202003519號