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尼康顯微鏡相差怎麽對準

2014-05-27  發布者:admin 

 相襯顯微鏡的仔細比對是必要的,以便產生最大的反差效果,而不會引入降解標本外觀或導致錯誤的解讀文物。 這種互動式教學探討變化的時候,聚光鏡環被移入和移出對準相位板的物鏡是通過目鏡(在不同的放大倍數)怎麽標本出現。

本教程初始化與標本出現在顯微圖像窗口上的教程的右側隨機選擇的相襯。 鄰近該窗口是物鏡後側焦點麵的圖(題為物鏡後側焦平麵 ;在左側)示出了物鏡相位板和聚光鏡的環形帶的附近。 默認情況下,物鏡相位板和聚光鏡環光錐是不對齊的,必須使用X-翻譯y平移滑塊被重新定位。 將這些滑動件使操作者能夠調節聚光鏡環形光錐的位置相對於所述固定物鏡相板。當兩個環體被集中時,獲得最大可能的標本對比度。

作為替代平移滑塊,鼠標光標可用於在窗口內拖動聚光鏡環形圖像,以便它可以在物鏡相位板的周邊之內的任何位置。 新的標本可以被加載到本教程通過使用選擇A試片下拉菜單,物鏡放大倍數可以通過選擇物鏡菜單中更改。 一個新的標本或物鏡選擇每一次,教程會自動重新加載的隨機偏差聚光鏡環和物鏡相環。

而使用伯特蘭透鏡或相位望遠鏡觀看的物鏡的固定相環時,操作者可以再執行調整到聚光鏡環形位置來對齊兩個用於相襯觀察(參見圖1)。 示於圖1是物鏡的後側焦點麵上的未對準的圖像(圖1(a)和圖1(c))和後聚光鏡纖維環和相位環已被正確地對準(圖1(e))。 也示於該圖中是通過目鏡(圖1(b),1(d)和1(F)),這表明,當在顯微鏡未對準試樣的顯示方式(圖1(觀看時,出現在相應的圖像b)和圖1(d)),並仔細對齊(圖1(F))按照下麵列出的步驟。

在試圖使一個顯微鏡相襯觀察,檢查儀器仔細,以確保所有物鏡包含相位板,並牢固地安裝在物鏡轉換器。 物鏡還應該順序地排列在其上排列的物鏡轉換器,從低到高的放大倍率,以便最大限度地減少1聚光鏡的環形帶和另一個之間切換的頻率。 通常情況下,10倍和20倍的物鏡,有著共同的聚光鏡環,因為這樣做的40倍和60倍的物鏡。 高度校正物鏡,如專為油浸apochromats,往往有相似的數值孔徑,並使用相同的聚光鏡環在更寬的範圍內放大倍率(40倍到100倍)。 低倍率相位對比(4倍和5倍),通常需要一個擺動鏡頭聚光鏡和聚光鏡專用環。

聚光鏡環形板也應順序排列,從設計用於低倍率物鏡的環形空間,並繼續直至1設計的最高放大倍數。 在一般情況下,在整個放大率範圍可覆蓋三個或四個獨立的環。 如果一個普遍的聚光鏡采用,定位最低的放大倍率環(例如,PHLPH1)到明槽的右邊,而其他板塊在周邊槽順序。 通常,試樣必須檢查在之前或之後相襯觀察明場,所以這種布置將提供一個容易的工作流程。

被推薦為相襯顯微鏡的對準下麵的步驟。

  • 放置一個明亮的染色標本在載物台上旋轉10X相襯物鏡成明照明模式下的光學通路。聚焦樣本,並關閉該視場光闌,直到它進入視場的邊緣。 用聚光鏡高度調節旋鈕,定位台下聚光所以各樹葉的視場光闌的是在清晰聚焦,並利用主聚光鏡定心調整旋鈕,以確保視場光闌的中心在視場中。 請仔細檢查顯微鏡配置,以確保科勒照明已經實現,並且標本是在大家關注的焦點。

  • 取出染色標本,並放置一個階段標本在顯微鏡載物台上。 在情況下,物鏡試樣僅具有最小的光程差(和可能難以顯現),配合已知能產生高對比度的相襯模式標本的顯微鏡。 轉動聚光器轉盤直到適當的環形定位在光路徑( 的Ph1或等效為10x物鏡)。 檢查以確保聚光鏡環顏色代碼或題詞相匹配的物鏡。 檢查聚光鏡孔徑光闌調節杆的位置,並將其移動到最寬光圈位置(專為相襯聚光鏡可自動執行此操作)。

  • 如果顯微鏡配備一個伯特蘭透鏡,使用指輪控製的透鏡擺動到位。 另外,取出顯微鏡目鏡中的一個,並插入一個階段望遠鏡進入觀察筒。

  • 同時通過目鏡或相位望遠鏡窺視,調整勃氏鏡或望遠鏡聚焦眼球管的焦點,直到在物鏡相板是大家關注的焦點,和聚光鏡環和黑暗的中性密度材料的明亮的圖像之間的重疊相位板是顯而易見的。 在許多情況下,在顯微鏡最初將不對準和纖維環的圖像將不能準確地疊加在中性密度材料中的相位板(如圖1(a)和圖1(c))。

  • 定位在聚光鏡環形定心銷(或螺釘)與調節環的位置用一對螺絲起子或適當的旋鈕,直到它是一致的物鏡標相位板(圖1(e))。 注意:不要試圖調整聚光鏡環的位置與主聚光鏡定心旋鈕(通常位於連接到顯微鏡聚光鏡安裝支架)。 這方麵的努力可能不會達到預期的聚光鏡環對準肯定會危及先前應該已經建立了科勒照明條件。

  • 當聚光鏡纖維環在正確的位置時,光通過該環通過聚光鏡將被施加到物鏡相位板,降低了環形圖像的強度的中性密度材料被衰減。 因此,如果聚光器環形不當居中,明亮的月牙邊會出現相鄰的物鏡相位板的中性密度材料(圖1(a)和圖1(c))。如果環的形象不相板的黑圓內放不下,那麽無論是聚光鏡失焦(和科勒照明是不成立的),或相望遠鏡(或伯特蘭鏡頭)不集中的物鏡後側焦點麵。 在某些情況下,甚至當相望遠鏡(或伯特蘭鏡頭)和台下聚光正確聚焦,聚光環圖像模糊,並出現失焦。 這可以通過從檢體低頻衍射引起的。 如果發生這種情況,從載物台上移除標本,並進行顯微鏡對準。

  • 如果聚光鏡環形圖像是顯著不同的尺寸從該物鏡相位板,檢查是否錯環形板已被安裝在所述聚光鏡(最可能的原因)。 另一種可能性,如果高數值孔徑的油浸物鏡被采用,是在聚光鏡前透鏡元件被設計為浸入。 在這種情況下,它可能是困難的(或不可能)疊加在相位板聚光鏡環形無油的聚光透鏡和所述顯微鏡載玻片(和/或所述物鏡和蓋玻片之間)之間的壓降。

  • 當聚光鏡環和物鏡相板在適當的調整,在圖1(e)所示的圖像應該出現在階段望遠鏡目鏡或用勃氏鏡到位。 在這一點上,在顯微鏡的配置是否正確觀察相襯照明試樣。

  • 用目鏡代替階段望遠鏡,或旋轉伯特蘭透鏡出光路徑,並檢查標本。 背景應該出現在色的中性灰色(取決於物鏡相位板的中性密度)與在高對比度可見的試樣。

一旦顯微鏡已經對準相位相反,它通常會保持其中心定位為相當數量的物鏡/年輪的變化,但應定期檢查,以確保正確對齊。 如果在顯微鏡開始偏離了對齊,出現在目鏡(或在計算機顯示器上)的圖像將出現越來越多像那些明照明觀察。



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