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奧林巴斯顯微鏡故障排除顯微鏡配置和其他常見錯誤

2014-09-12  發布者:admin 

  顯微攝影,喜歡任何形式的攝影,是容易發生各種故障和錯誤不管的顯微鏡設備或經驗水平和技能的顯微攝影複雜性。 錯誤必須仔細檢查識別的源碼,這通常是由於無論是設備故障,可憐的試樣製備技術,不當,或處理錯誤。

大多數攝影錯誤可以追溯到奧林巴斯顯微鏡的光學結構,包括調整不當的照明,使用錯誤的過濾器,或不正確的設置的聚光鏡和/或光圈。 下一個最常見的問題的出現是由於較差的試樣製備和汙垢,灰塵,油脂或汙染的標本或光學顯微鏡。 圖1給出了一個照片的小麥鏽病膿皰(由感染由真菌引起的 柄鏽菌 幾種常見的錯誤說明攝影)。 本圖的中心部分(括在一個白色的圓圈)失去了焦點,和左上和右角上表現出的陰影從視場光闌和漸暈。 在使用黑白電影攝影對比誤差在圖1的左下部分表示為一個地區顯示對比度的過濾器,導致在顯微圖像的對比度太差的選擇。 球麵像差焦點問題和試樣的細節和由於振動,比較缺乏,汙染油對物鏡鏡頭前說明在白色的圓圈在圖1的右側。 也包括在顯微照片是錯誤和粉塵汙染的膜損傷。 這些和其他類似的錯誤,如標本染色,太多或太厚的使用,代表在常規攝影一技術人員麵臨的最常見的錯誤。 以下段落的具體地址錯誤和顯微攝影並提出補救缺陷。

圖像離焦模糊或不清晰, 一個缺乏應有的關注和/或模糊的圖像的代表之一,顯微攝影中最常見的錯誤。 這些錯誤的來源通常是在顯微鏡下站或焦距調整不當的光學膜平麵之間振動的結果。 經常出現在焦點,通過目鏡將影像,但導致照片模糊或不清晰(圖2(a))。 這是一個跡象表明,膜麵和光學觀察可能不齊焦。 在配備了調焦望遠鏡,顯微鏡,檢查網線以確保它們是清晰的十字。 仔細調整目鏡分劃板之間的焦點(如果有)和調焦望遠鏡,兩刻線同時在重點。 如果鏡頭揭示了一個重點是標本,但在照相目鏡分劃板不集中,然後將標本圖像會出現反銳化掩膜和反之亦然。 用AG亚游集团的交互式Java教程 光掩模原版操作 實踐這一技術。

齊焦的錯誤經常發生與低倍率(1倍)的物鏡在焦膜麵深度很淺,輕微的顯微鏡聚焦旋鈕的結果在非銳化的圖像信息調整(見圖2(a))。 在這兩個目鏡與調焦望遠鏡刻線應清晰,與目鏡的瞳距應妥善保養。 使用一個低倍率物鏡(10倍)仔細聚焦試樣通過目鏡使用微米或標本與鋒利的邊緣清晰度。 其次,在調焦望遠鏡直到圖像清晰的調整分劃板,確保該網線薄十字也集中和明顯的疊加時,在空中圖像。 許多製造商提供售後重點援助,這是一個簡單的可調放大鏡,可以用來查看調焦望遠鏡分劃板輔助聚焦調節。 調整目鏡就齊焦與對方和調焦望遠鏡。 同時檢查投影透鏡或光電管目鏡以確保其牢固就位。

當使用一個標準的單反相機後顯微攝影,圖像必須注重通過相機對焦取景器,這通常是一個毛玻璃屏。 在低倍鏡下,屏幕上不存在一個問題,但如果地麵玻璃表麵過於粗糙,聚焦可以在更高的放大倍率變得困難。 如果發生此問題,切換到聚焦屏具有清晰的圖像至關重要的焦點中心,或修改的大畫幅相機的聚焦屏的固井小蓋玻片到地麵的玻璃屏幕表麵(如建議 約翰德利 在他的書中” 通過顯微攝影 “用加拿大膠作為膠粘劑)。 由此產生的結合提供了在屏幕的蓋玻片覆蓋的區域一個透明的中心。 多莉也建議用軟鉛筆或墨水畫十字或印度的兩條對角線上的玻璃表麵固井在蓋玻片之前。 這個程序提供了一套“十字”視差聚焦。

圖2給出了一些照片,說明在顯微鏡聚焦誤差(圖2(a))和非銳化的圖像由於振動(圖2(c))。 標本是椴樹一薄片(椴樹)幹沾四混合專為植物組織。 圖2(a)描述了一個典型的照片,是不是在重點由於光學和膠片平麵之間的距離調整不當引起的誤差,通過以上討論。 在右側(圖2(c))是一個照片相同的視場,但受劇烈振動,導致圖像的清晰度損失。 圖2的顯微照片(b)說明了椴樹染色薄片的焦點。

顯微鏡是誰像散和必須戴眼鏡能生產經驗的銳利的圖像,即使試樣出現在通過目鏡的困難。 它往往是很難通過調焦望遠鏡而戴眼鏡的焦點調整試樣。 該方法是使用一組高眼點鏡或聚焦望遠鏡改正問題。 與顯微鏡檢查製造商確定這些配件可供。

焦點也可以是一個問題時,試樣的製備是太厚或當顯微鏡幻燈片是在不經意間檢查顛倒(圖3(a))。 厚度誤差常常可以使用長工作距離物鏡克服,但最好的解決方法是重新使用較薄的切片標本或擠壓蓋玻片更緊密的製備。 一個倒置顯微鏡幻燈片的簡單的解決辦法是翻轉過來,所以玻璃蓋麵臨的物鏡(圖3(a)和3(b))。 偶爾,一些蓋玻片就會粘在一起和由此產生的顯微鏡玻片標本製備過程中,將有兩個或兩個以上的蓋玻片,引起球麵像差問題產生的顯微照片。 如果懷疑這個錯誤,仔細檢查包含幹涉條紋的存在的顯微鏡載玻片蓋玻片,導致兩個蓋玻片之間的剩餘空間將它。 力最高的蓋玻片用鑷子。

校正鋌的高倍幹物鏡或高幹物鏡具有高數值孔徑與不匹配的蓋玻璃的使用不正確的調整(蓋玻片)往往是不清晰的照片的原因(圖3(c))。 這些錯誤是由於下或球麵像差矯正當顯微鏡蓋玻片要麽太厚或太薄。 在這種情況下,就不可能精確聚焦顯微鏡獲得清晰的圖像。 在蓋玻片厚度問題的解決方案是一個正確的厚度取代一個不合適的蓋玻片(通常是1號½玻璃蓋,平均為0.17毫米厚的0.16和0.19毫米)之間的一個標準差或使用物鏡配備一個校正環可以被調整以符合蓋玻片厚度。 如果蓋玻片厚度不能調整(即,它是粘到試樣滑動)或如果厚度是未知的和一個校正環的物鏡是不可用的,那麽問題有時可以利用類似的放大倍數的油浸物鏡補救。 由於浸泡油的折射率,蓋玻片厚度變化非常相似,變得不那麽重要了。

顯微照片如圖3所示的球麵像差誤差的影響。 標本染色切片馬鈴薯( 馬鈴薯 )與疫病菌感染的組織。 圖3(a)顯示一個倒置的影響(倒)的顯微鏡載玻片,導致圖像中由於球麵像差的對比度和清晰度。 同樣地,圖3(c)闡述了校正衣領上的高數值孔徑和高放大倍率的物鏡不正確的調整。 這個標本的蓋玻片厚度為0.17毫米,但校正衣領被調整為一個0.23毫米厚。 圖3(b)顯示的照片應該出現在蓋玻片厚度進行優化和顯微鏡是適當調整。

反銳化圖像的另一個原因是油(或者浸泡油或天然油來自指紋)對物鏡鏡頭前的照片上,目鏡透鏡(凸透鏡),或標本的幻燈片。 在幹燥的物鏡前透鏡目前油是一種常見的事故可能發生時,其物鏡是放置在位置超過先前塗油滑。 如果一個立體顯微鏡是可用的,刪除的物鏡和/或照相目鏡並仔細分析它在高放大倍率。 石油汙染經常可以看到前麵的鏡頭使用這種技術。 從顯微鏡鏡頭去除油可能是困難的,往往導致取代舊的灰塵在透鏡與新的灰塵和碎片。 清潔鏡頭先輕輕去除多餘的油從晶狀體組織表麵,然後用一個木製敷貼藥棉或高質量的鏡頭紙擦拭鏡頭清潔後與三氯乙烷,滋潤醚,或二甲苯。 避免使用過多的溶劑,可用於固定透鏡攻擊其山水泥。

汙染的除油後,用駝毛或黑貂刷除去灰塵,汙垢,或碎片,可能對鏡頭的存在。 刷可以脫脂浸入小體積的醚和搖動它幹。 一個氣球或橡膠耳注射器經常用來吹了鬆散的灰塵從鏡頭,但是不要用罐裝空氣,因為它可以留下殘留物是更難以去除比浸泡油。 浸泡油汙染最常發生在設計使用浸沒介質物鏡,但幹的物鏡也可以成為汙染時,擺在一個蓋玻片有殘餘油從觀察使用浸沒物鏡。 經常檢查幹物鏡前透鏡汙染時遇到錯誤或不清晰的圖像的焦點與這些物鏡。

在許多古老的顯微鏡,物鏡是為了正確匹配到目鏡的光學像差在最終圖像。 非銳化的圖像也可以通過顯微鏡主體管和物鏡之間的不匹配造成的機械尺寸管長度。 最常用的固定長度的顯微鏡的物鏡是設計一個160毫米的管的長度,但這是不變的和使用具有不匹配的管長度的物鏡將導致球麵像差的引入,降低圖像的清晰度。 管長度的要求通常是刻在物鏡筒,以保證在使用前檢查該值的物鏡是用顯微鏡兼容。 與無限光學校正的物鏡是用於配備管透鏡顯微鏡,和不使用舊標準的固定管長度的顯微鏡是合適的。 同樣的,設計為一個固定的管的長度物鏡不能用無限遠校正顯微鏡。

圖4說明了幾個錯誤,通常采用浸泡油。 標本是一個多重染色薄片的苜蓿植物組織,已經感染了冠癭病的真菌, physoderma alfalfae 左邊的照片(圖4(a))演示了通過高倍放大形成的圖像(60X)油浸物鏡時,氣泡被困的顯微鏡蓋玻片和物鏡的前透鏡之間。 在這些條件下,所得到的圖像模糊和不清晰的,遭受巨大的損失,對比。 如果目鏡是刪除,泡油可以在物鏡後焦麵清晰可見。 這個錯誤通常發生在油物鏡,通常有一個稍凹的鏡頭前,降低至油池,一直放在蓋玻片表麵。物鏡 不應放入浸泡油。 相反,最好的做法是“搖擺”的物鏡為上方油與刷卡動作通過旋轉接頭避免空氣滯留蓋玻片和物鏡的前透鏡之間。 圖4(c)闡述了類似條件下采取的照片,但用幹60X物鏡。 由此產生的圖像是更好的焦點和具有比由圖4顯示了顯著更多的對比(一)。 在這種情況下,圖像質量的劣化是由於汙染的油對物鏡鏡頭前。 幹物鏡相鄰放置在顯微鏡下物鏡轉盤的油浸物鏡容易被油汙染時的物鏡是通過意外甩油池在顯微鏡蓋玻片。 圖4中的圖像(b)是免費的錯誤和代表感染苜蓿組織應出現。

間歇對焦錯誤經常發生由於振動,通常被看到時,高倍率的物鏡是用於長時間曝光。 用聚焦顯微鏡上使用可用的最高放大物鏡大幅振動問題的試驗樣品。 連續振動通常會導致試樣出現在運動。 振動與表或氣流從空氣處理機組和球迷會慢慢失去焦點顯微鏡。 允許顯微鏡同時聚焦在樣品和測量振動帶顯微鏡的聚焦所需的時間保持靜止。 如果焦點落立即發生,某種形式的振動隔離是必需的。 然而,如果顯微鏡將在幾分鍾或更長的高倍率的焦點,然後振動具有足夠低了大多數攝影一個微不足道的影響。

連續振動誤差的影響可以用很快的快門速度來部分解決,通常在一個或幾個百分之一秒的順序。 電子閃光單元還可以用來與更快的快門速度來克服在顯微攝影振動誤差增加光照。 然而,這種補救隻是最小化振動誤差的影響並不會消除的原因。 在振動問題的顯例,顯微鏡下應安裝在振動隔離的一組合適的減震器。 一些顯微鏡製造商和一些售後供應商提供的振動“墊”(通常用氯丁橡膠,矽,或類似的聚合物),可以放在顯微鏡下足墊。

載物台漂移是一個問題,當載物台的重量引起的運動在顯微鏡聚焦架,降低載物台(標本),使顯微鏡失去焦點。 在許多現代顯微鏡,聚焦架張緊機構包括消除或減少漂移。 年長的顯微鏡,體驗這個問題可能會有磨損或鬆動的焦點架應該由專業維修服務。

一些振動問題是由照相機的機械快門的行為引起的附件。 總是使用電纜釋放具有機械快門和增加曝光時間超過一秒的中性密度濾光鏡相機如果振動問題依然存在。 較長的曝光時間將減少閘門振動的影響,隻發生在暴露在最初的部分。

對比誤差,差圖像分辨率 貧窮的對比度通常是一個跡象表明,台下聚光鏡孔徑光闌打開太寬,導致耀斑和大大降低圖像的對比度。 這個問題困擾著所有類型的攝影,包括顏色,黑色和白色,和數字。 要糾正這個問題,去掉其中的目鏡和插入相位望遠鏡進入眼管或(如果顯微鏡裝有)擺動的貝特朗透鏡的光路。 同時觀察物鏡後焦平麵,調節聚光鏡孔徑光闌直徑是65和百分之80,直到它的物鏡之間的縫隙(達到適當的 柯勒照明 和最大限度地提高圖像的對比度)。 使用反射光顯微鏡時,調整視場光闌孔徑光闌和改善對比度。

如上所述,利用蓋玻片,有一個不正確的厚度也可能導致的損失,對比高數值孔徑的物鏡(和圖像清晰度的缺乏)由於球麵像差。 檢查物鏡桶是否與蓋玻片厚度,或切換到一個蓋玻片厚度校正環的物鏡。 反射光的物鏡是觀察和顯微攝影沒有校正蓋玻片的使用,以避免這種類型的物鏡上。

試樣本身可以對比問題的根源。 透明的和未染色的標本是很難使用明場照明圖像時使用的對比增強技術,如相對比,產生更好的照片,霍夫曼調製對比度,或微分幹涉對比。 斜光照也會提高未染色標本的對比。

在黑白攝影技術對比過濾器時,可憐的過濾器的選擇往往會導致缺乏導致試樣的對比照片。 正確使用對比的過濾器將當用染色標本確保更好的再現的標本細節,但隻有當過濾器的顏色是互補的標本。 當光的顏色相同的染色標本是透過試樣,其結果是減少了試樣與背景的對比度。 使用時,有最小的或僅部分吸收在該地區的試樣吸收可見光濾波器得到最佳的結果。 對比也可以在黑色和白色的高反差膠片使用顯微攝影術的改進(如柯達技術PAN)或通過化學開發商產生高對比度的使用。

在顯微攝影的幾種對比誤差在圖5,這說明了一係列的多彩色馬鈴薯明場圖像( 馬鈴薯 )組織薄片。 左邊的照片(圖5(a))被fujichrome 64t,鎢平衡的透明薄膜,通常顯示的對比度顯著量當妥善處理。 在這種情況下,圖像是缺乏由於不當的處理和/或聚光鏡孔徑光闌打開太寬的對比。 圖5(c)說明了一個黑白照片拍攝的同一領域,但使用不同的過濾器和加工有高反差顯影液。 圖5中的對比過量(C)是由於使用的增加在黑白攝影的對比色過濾器不正確的選擇。 而不是使用一個過濾器,在可見光譜的綠色區域部分吸收(帶出紅色的vesicules對比),一個柯達Wratten 25號紅色濾光片進行曝光和電影然後在產生的過多的對比條件下開發商錯誤處理。 中心的照片(圖5(b))說明了馬鈴薯薄片作為它應該出現。

可憐的對比也可以發生在成像樣品太厚,上麵詳細討論。 這種情況可以通過仔細的樣品製備克服使用較薄的標本,用蓋玻片固定到位並用透明膠固定,如加拿大香脂。

雖然少了彩色電影的問題,太多的對比,在黑白攝影經常發生。 主要的原因,如上麵所討論的,是與染色標本對比濾波器不正確的選擇,但薄膜的加工誤差也應該懷疑。 使用高對比度的電影如柯達技術便時,薄膜的開發者的選擇應符合用於捕獲圖像的濾波相結合。 如果對比濾波器設計減少試樣的對比選擇,那麽開發者也應該產生的低對比度圖像的黑白底片。 相反,當使用對比的過濾器來提高試樣的對比,選擇一個高對比度的軟件工程師,在最終圖像的對比度產生正確的金額。 使用一個正常的膜的高對比度的開發商往往會導致過多的對比度的圖像,將延長開發時間。 因為選擇電影的大範圍內的黑白電影和發展代理商,應該高度重視發展過程中以產生微調對比照片。

在顯微攝影分辨率差通常是對於台下聚光鏡孔徑光闌調整不當的結果。 當一個顯微鏡是正確配置 柯勒照明 孔徑光闌,應該有一個虹膜直徑開口位於65和百分之80之間的縫隙的物鏡。 如果打開隔膜太遠,會造成圖像的對比度差(圖6(a))和照片將遭受損失的知名度。 如果光圈開縮小到直徑小於物鏡孔徑百分之50,分辨率明顯減少偽影的照片成為明顯的衍射。 當孔徑光闌孔減少到最小,嚴重惡化的發生和照片變得黑暗和模糊的衍射效應,主要是暗暈周圍的精細結構的細節邊緣。 類似的情況發生時,台下聚光鏡設置太低,在顯微鏡台。 這兩個錯誤是在大小和聚光鏡產生的光照錐質量下降的結果,不允許物鏡在其完整的數值孔徑的操作。

在顯微攝影常用的分辨率誤差,如圖6所示,它說明了一係列的梅花樹莖組織顯微染色薄片染黑的結,一個梅花病害的真菌引起的 病梨孢 (也被稱為 口蘑為 )。 梅花樹組織切片選擇性著色透露細節和區分亞細胞成分之間的觀察。 在這張圖中,凝汽器孔徑光闌開口設置在捕獲顯微圖像質量的影響,利用fujichrome 64t透明膜與物鏡顯示(40x planachromat = 0.75)和擺上鏡頭的消色差聚光鏡( = 0.90)。 近似聚光鏡開口尺寸 圖6(a)~百分之95( = 0.81);圖6(b)-百分之60( = 0.54);和,圖6(c)百分之20( = 0.18)。

圖6(a),其中孔徑光闌設置一個位置中,聚光鏡和物鏡數值孔徑是相等的,多的很好的標本細節是可見的,但仍有相當數量的散射和眩光和整體形象的對比嚴重損害。 形象也比其同行更明顯,這是與一個較小的光圈設置了。 圖6(b)顯示在聚光鏡孔徑大小,產生一個數值孔徑約百分之70的物鏡梅幹。 減少眩光,形象十分鮮明,和精細的圖像細節是目前沒有明顯的衍射效應。 這個標本,在圖6的顯微照片(b)代表聚光鏡孔徑光闌的優化設置。 當膜片關閉到最小的設置對物鏡的數值孔徑百分之25(圖6(c)),精細的圖像細節變得模糊的衍射效應。 圖像還需要在一個黑暗的整體鑄造生產的試樣中的顏色變化。 這個概念可以更詳細的使用交互式Java教程的分期探討聚光鏡 孔徑光闌

從上麵的討論很明顯,聚光鏡孔徑光闌應該設置一個位置,將提供一個折衷的混合物直接與偏轉光,取決於,在很大程度上,吸收,衍射,和試樣的折射特性。 這一定是沒有壓倒文物,模糊的細節和對比增強圖像完成錯誤。 圖像細節和對比了必要的生產最好的照片也依賴於折射率,和其他標本的相關的參數的光學特性。 利用對比度增強技術時,顯微鏡的適當調整和配置是保證這些特殊條件下試樣的準確再現的重要細節。

當孔徑光闌誤關得太遠,偏離光開始模糊的直接照明光線,產生衍射的文物,造成明顯的條紋,條紋,在顯微照片和/或模式的形成。 其他問題,如折射現象,也可以在一個圖像,不是真正的產生明顯的結構。 另外,打開聚光鏡孔徑過大引起不必要的眩光和光散射從樣品表麵的光學顯微鏡。 這導致了對比和洗出來的圖像細節的重大損失。 正確的設置會有所不同,從試樣試樣,和經驗豐富的技術人員將很快學會準確地調節聚光鏡孔徑光闌(和係統的數值孔徑)通過觀察圖像而無需在物鏡的後焦平麵膜片。 事實上,許多顯微鏡相信顯微鏡係統的數值孔徑的臨界壓優化圖像質量是攝影最重要的一步。

照明誤差 建立適當的條件 柯勒照明(Köhler) 也許是關鍵的顯微照相顯微鏡配置最重要的方麵。 錯誤發生最頻繁的照明光源時不正確的定位和/或物鏡和聚光器不與彼此或與顯微鏡光軸中心。 輕微的這些組件的對準誤差可能不顯著,而通過目鏡觀察試樣,但錯誤會導致照片的強度梯度的產量。 其結果將是一個照片顯示不均勻光照與試樣的圖像或背景比其他更黑暗的一麵。

當照片顯示照明錯誤的證據,首先檢查燈絲對齊,燈箱反射器的位置,和擴散的屏幕,位於光源與鏡座之間。 一個失蹤的擴散屏幕將導致燈絲被投影到樣本圖像共軛平麵和可能導致的亮點,圖像的暗斑,和照度不均勻的顯微照片。 如果擴散屏幕正確定位,檢查燈絲對齊(記得之前檢查絲對準的光學路徑去除擴散屏幕)。 目前許多顯微鏡特征預為中心的鹵素燈和內置的擴散濾波器。 這些儀器,燈泡的燈絲中已經實現了在裝配過程中,由製造商。 圖7說明了顯微鏡的光端口的一個典型的看法時,纖維是通過放置一張白紙,可見毛玻璃,kimwipe,或在顯微鏡鏡頭清潔港口組織。 圖7左側的端口(一)包含一個燈絲是嚴重的對齊和不正確放置一個圖像,將完全填充孔徑光闌也不是物鏡的後焦平麵。 使用平移調整燈的外殼,燈絲成為關注的焦點(圖7(b)),然後集中在光端口(圖7(c))。

適當對準絲困難可以如果聚光透鏡聚焦產生不正確。 大多數內置照明顯微鏡缺乏聚光透鏡的調整,這是預對準和聚焦在工廠。 在這種情況下,顯微鏡下必須由訓練有素的技術人員提供服務。 年長的顯微鏡可有聚光透鏡調整,或可配備外輻射源,有各種各樣的調整。 在燈絲被正確對齊,在燈箱與鏡座之間的位置取代擴散屏幕。 請注意,在舊的顯微鏡配備鎢燈泡,燈泡內的燈絲的位置可能會有所不同從一個到另一個燈。 然後恢複顯微攝影,研究顯微鏡照明通過盡可能廣泛的領域通過查看通過目鏡沒有標本中出現。 這是通過選擇最低的倍率的物鏡可放置一個中性密度過濾器的光路中,減少光照強度完成。 如果視野似乎仍然有不均勻的照明,然後對台下聚光鏡對準的嫌疑。

該聚光器通常配有一副定心螺釘,使技術人員到中心的凝汽器相對於物鏡和顯微鏡光軸。 本程序建立K hler照明ö是必要的,但聚光鏡可以成為錯誤排列在日常使用的顯微鏡。 檢查聚光鏡位置,第一旋轉10X物鏡為輕度染色標本在顯微鏡載物台上的地位。 其次,通過提高或降低聚光器采用齒條機構位於下方的載物台重點視場光闌。 膜片應加在試樣的聚焦圖像和光圈關閉直到個別葉片出現清晰的虹膜開口直徑約25-40 %的視場填充。 使用定心螺釘位於聚光鏡殼體中心視場光闌開在視場和刀片打開直到他們隻是視野之外的。 如果視場光闌葉片掩蓋了太多的視野,他們可以是一個不均勻的照明光源。

物鏡安裝在旋轉炮塔很少對準誤差的來源是因為他們被固定到Dé緩和位置。 一些偏光顯微鏡有一個專門的物鏡轉盤允許物鏡集中在光通路由一對定心螺釘裝置。 這些物鏡是特別有用,當耦合到一個預中心的圓形載物台,旋轉通過一個360度角(舊顯微鏡配備一個循環載物台往往需要的個人物鏡為中心)。 一個雙折射試樣可以放置在載物台上,用來協助中心的物鏡在光學通路。 避免與MIS物鏡一致的問題,經常檢查以確保接頭牢固地定位在Dé緩和指數停止範圍。 旋轉時,管口應“點擊”的光學路徑中的同一位置的每一個物鏡。

漸暗的圖像外邊緣(俗稱漸暈)在照片通常是由不正確的對準聚光器引起,或聚光鏡設置不適當的高度在顯微鏡台。 當電容器配置不正確,在縮小孔徑光闌開口尺寸,可以導致變黑的在領域的邊緣,或漸暈在顯微照片(圖8(c))。 漸暈的另一個原因是使用具有放大係數與乳液膜的大小和無法滿足全膜對角不兼容的照相機目鏡,或有一個或大或小的長度比在膜平麵圖像工程是必要的目光管。 作為一個例子,一個4×5寸照片對角線為145毫米。 當使用一個0.63x倍率投影透鏡(數字CCD相機常用的),有一個21毫米的場大小的10倍的目鏡將產生一個圖像直徑132毫米,產生漸暈在圖像的角落。 更改為1x或(更常見)2.5倍投影鏡頭產生210和525毫米字段大小,分別。 高倍率的投影鏡頭會產生是免費的暈影圖像。

顯微照片如圖8所示的特征一個染色薄片胎豬的牙。 圖8(a)顯示牙齒薄片當燈絲不正確的中心。 在這種情況下,有一個逐漸暗淡的圖像從右到左的照片。 漸暈的圖像,如圖8所示(C),這表現在逐漸暗淡的邊緣處的圖像區域,包括一個圓形圖案包圍圖像由於不正確的聚光器高度。 當相機的快門速度太快讓電影的反應也會發生此錯誤(快門速度比快0.01秒)。 圖8的顯微照片(b)顯示的圖像應該出現在顯微鏡照明配置得當。

當一個顯微照片揭示黑暗的角落,清晰的光圈快門葉片圖像,然後現場隔膜可能不充分打開,應在目鏡是可見的。 的視場光闌虹膜開口大小適當的調整隻是視野之外的至少包括場區外的照片。 結果在類似的顯微照片的另一個錯誤(暗角)經常發生時,相機的快門位於太遠高於視點。 在快速的快門速度,相機的快門葉片的圖像可以被記錄在照片的輪廓圖像,錯誤被稱為 快門陰影 雖然現代顯微鏡,經常有匹配的相機係統較少,快門陰影可以是一個問題時,將有一個完整的透鏡係統的照相機。 在後者的情況下,鏡頭將決定視點位置。 為了緩解這個問題,把中性密度過濾器的光路中,增加的曝光時間,從而允許較慢的快門速度。

黑斑和碎片 汙垢,黑斑,和碎片的顯微照片是問題的方法常見的來源,並可能發生在與圖像或作為一個模糊的點上的薄膜的焦點。 這種類型的汙染可以表現為有色神器使用彩色膠片的時候,又是黑白電影的黑色或灰色的斑點。 如果碎片出現在了大家關注的焦點,這通常是發生在透鏡表麵,居住在一個平麵共軛聚焦試樣汙染。 物鏡和任何玻璃(通常顏色平衡或校正濾波器)相鄰的顯微鏡視場光闌往往容易收集灰塵,這些組件躺在附近的一個主要的圖像共軛麵。 汙染的近場的隔膜將出現在電影焦點,和劃痕或灰塵過濾器放置在視場光闌往往是一個源的煙霧和碎片的文物。 玻璃表麵被劃傷會出現在照片不清晰的地方,將氣泡嵌在光源聚光玻璃或在吸熱器。 通常這些氣泡會有一個藍色的色調時,記錄在膠片上。 屏幕的玻璃內的灰塵和碎片或缺陷擴散屏幕表麵汙染(泡沫)的粉紅色或藍色斑點的顯微照片的結果。

汙垢和碎屑的另一個常見的來源是試樣本身,也居住在一個共軛平麵。 粘塵的蓋玻片表麵會出現無黑點在膜汙染,而在蓋玻片附近或混合試樣通常會出現碎片是在與試樣的焦點。 在中間圖像平麵透鏡的灰塵和碎片是不常見的,但有時也會發生。 這架飛機是位於目鏡固定膜,它可以成為汙染當目鏡是從顯微鏡鏡頭最近的固定膜片變髒。

當查看汙染通過顯微鏡目鏡,試圖找到源頭,慢慢把每個目鏡單獨確定碎片點旋轉的一個目鏡。 如果是這樣的話,那麽汙染位於目鏡本身。 旋轉鏡的光學路徑中的其他組件,如濾波器,投影鏡頭,攝像係統,和聚光鏡時,試圖找到灰塵和碎片來源。 在某些情況下,它有助於捕捉構造一個記錄是被轉動的物鏡顯微照片。 將試樣而來回通過目鏡觀察以確定碎片的動作與試樣。 最後,擺動的物鏡和聚光鏡頂部透鏡的流入和流出的光路,檢查是否與物鏡或聚光鏡碎片移汙染。

偶爾,纖維和纖維之間的楔形葉片可能成為在該領域的膜片或夾在膜載體內的相機或黑盒。 當這種情況發生時,碎片會出現清晰的(見圖9(c))。 這種類型的汙染是更難以診斷,可能存在一些問題與去除。 如果在視場光闌有雜物,一個經驗豐富的維修工程師應采用顯微鏡清洗。 在相機的碎片後可以用壓縮空氣清除或駝毛刷。 從鏡頭,過濾器清潔汙垢和碎片,和試樣滑動應仔細做鏡頭紙或軟棉拭子。 使用可壓縮空氣在距離或輕輕掃用駝毛刷舉行刪除任何鬆散的泥土。

圖9給出了幾種顯微照片顯示的灰塵和碎片除了場曲率誤差汙染誤差。 標本是一個多重染色薄片蘋果樹感染雪鬆蘋果鏽幹,影響了美國北部的落基山脈以東的蘋果樹的一種病。 它是由真菌引起的 蘋果杜鬆virginianae 可落葉喬木和殘疾的果實讓他們賣不出去。 的顯微照片示於圖9(c)顯示的灰塵,碎片重汙染的影響,並對黑斑圖像。 產生的一些原因,這些文物,和碎片可以在不同的區域上的顯微鏡和/或標本按上麵的討論。 圖像的焦點問題產生的場曲像差瘟疫的照片如圖9(a),它具有鮮明的定義在邊緣,但在中心失去焦點。 這些錯誤的問題將在以後討論。

亮點和鏡麵反射 來自於從高架照明或輔助照明從外部光源的鏡麵反射,可以對照片的亮點。 這些錯誤是特別流行時,很長時間暴露在熒光顯微照相。 為了解決這個問題,可以關閉頂燈(或輔助照明)或覆蓋地區的直接影響。 上了年紀的顯微鏡類似的問題發生在當一個分束器是用來查看雙目頭和管之間的。 繞過這個問題通過調節分束器的位置的所有顯微鏡照明被引導到光電管。 反思也成為一個問題,當標本成像而沐浴在溶液中或通過一個非常厚的玻璃蓋和/或標本夾(超過1毫米)使用長工作距離物鏡。 有沒有簡單的治療當成像通過厚厚的玻璃,但從水溶劑的表麵反射可以采用水浸的物鏡了。

在照片的亮點可以發生在傳統的單反相機采用了積分鏡頭捕捉的圖像。 類似的位置也與目鏡照相機鏡頭,減少了在顯微鏡的投影透鏡共同。 攝影機鏡頭的前表麵應定位為接近投影透鏡的出射點盡可能避免亮點。 如果太接近,物鏡的後透鏡的圖像可以被記錄為一個焦點上的電影。 現場將出現明亮的透明膜,或在彩色或黑白底片暗斑。 常能緩解這個問題可以通過重新定位相機相對於照相機目鏡或投影透鏡。 為了避免暈,小心不要太遠的投影透鏡移動攝像機。

場曲率誤差 當顯微鏡的邊緣清晰,但中心已經失去了它的焦點(圖9(a),這個問題可能是 場曲率 在物鏡像差。 檢查以確保它是標誌物鏡桶平場 指示物鏡,一直是平坦的場光學矯正。 未矯正的物鏡不會產生整個顯微鏡視場清晰的影像。 這個錯誤也會發生在反射光試樣時,試樣略傾斜或一個安裝角。 要糾正這個問題,重新安裝的標本或使用橡皮泥和壓縮機提供一個可調的水平的基。 大多數物鏡顯示有限數量的場曲像差由於在軸和離軸成像光束路徑的距離的變化。 在這種情況下,利用細聚焦旋鈕漂移通過從邊緣向中心集中,以確定場曲像差。 更換物鏡與平場物鏡未解決色差問題。 如果物鏡更換幾乎是不可能的,限製記錄在照片的中心區域的領域盡可能,或安裝一個高倍率的投影鏡頭減少字段大小。

帶霧 當照片顯示帶狀區域,霧或淘汰,那麽問題可能是通過打開相機非常簡要的光線引起的。 這種情況也會發生在相機背麵有沿鉸鏈漏光或抓住。 霧度將取決於時間的後麵是開放的長度和房間的光亮度。 為了緩解這一問題,使某些電影是完全重繞打開相機之前回來。 如果懷疑有漏光,有專業的維修人員檢查相機回來。



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