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尼康顯微鏡選擇熒光蛋白的雙標記實驗

2014-10-13  發布者:admin 

通過熒光蛋白和其色移性遺傳變異體顯示出了廣泛的激發光譜和發射光譜曲線設計使用兩個或更多的同時這些獨特探針的活細胞成像實驗時,往往需要專門的考慮。主要關注的是從顯著程度的排放而導致的譜法,熒光蛋白的組合重疊通常表現出潛在的出血,經過文物。這種互動式的教程探討匹配的熒光蛋白雙標記的調查與問候光譜帶寬和重疊,激發效率,發射窗口的尺寸,並且需要設計合理的實驗等參數。

教程初始化與從熒光蛋白(CFP蔚藍色和HcRed - 串聯)中出現的光譜曲線窗口重疊在汞弧光放電燈的發光光譜的一個有用的組合的吸收和熒光發射光譜圖。還包括在初始化時該窗口是適當的熒光團的二色性反射鏡的配置文件,以及用於發射濾波器帶寬配置文件建議的出發點。鼠標光標可用於拖動沿著光譜曲線窗口的波長軸的灰階發射濾波器帶寬的界限來確定最佳位置。上為每個發射濾波器的控製的右手側的雙滑塊組合或箭頭按鈕可用於調整帶寬,中心波長可以用左手箭頭按鈕來改變。拖動左邊的滑塊也意味著整個圖形的帶寬配置,同時拖動右邊滑塊增加或減少的帶寬大小。虛擬發射器的電流的中心波長和帶寬的值被連續地更新,並且在紅色標記上方的滑塊顯示。滲出到(如果有的話)的比例是不斷更新的每個信道和光譜曲線窗口的下方顯示。 

尼康顯微鏡該二色鏡滑塊控製這些元素的截止波長曲線的位置,並且可以使用相鄰滑塊的顏色編碼的單選按鈕的每個信道之間進行切換。同樣,汞燈的光譜分布可以通過停用激勵源複選框被關閉。 (默認:水銀弧光燈)吸收(ab)和發射器(EM)頻譜的曲線可以通過從上方的照明源頭黃色顯示窗的框去除勾選被禁用。當激光源被從照明下拉菜單選擇,基於在激光波長處的摩爾消光係數的激勵效率百分比顯示在照明顯示窗口上方的綠色方塊。激光線,繪製顏色近似的頻譜配置文件窗口的波長,可以通過禁用激勵源複選框被停用。為了保持當前的教程的參數(顯示的激發和發射濾波器的配置文件等),而經由探針或照明源的列表進行切換,在維護狀態複選框可以啟用。新的熒光蛋白類可以使用組單選按鈕的光譜曲線窗口右側選擇隨選擇的探討下拉菜單。 

在計算本教程的值所使用的吸收光譜和熒光發射光譜記錄在受控條件下進行標準化,僅供比較和顯示的目的。在實際熒光顯微鏡調查,光譜曲線可能會因環境的影響,如pH,離子濃度,溶劑的極性,以及在局部探針濃度的波動而變化,因此,可能不同於實驗條件下實際觀察到。



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