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尼康顯微鏡相差板的標本對比配置的影響

2014-10-15  發布者:admin 

  環繞的傳輸延遲性能(衍射)中光通過相差顯微鏡相差板環能顯著影響整體標本的對比觀察。 這種互動教程探討對比度變化引起的改變相板的吸收和遲滯特性。

與隨機選擇的樣本圖像出現在初始化教程 相差對比圖像 在右手側窗的教程。 每個標本用於本教程是比較厚的顯示器的對比度的影響是依賴於物鏡相差板配置。 為了操作的教程,使用 相差對比模式 滑塊來改變,與一個標準的黑暗之間觀察到標本對照(低 DL )和高濃度(高密度的黑暗中(中性) DM )相差板。

當滑塊轉換,相差 板(以上滑塊)變暗表明減少傳輸延遲性能,和許多標本進行對比的變化特征。 在某些情況下,對比度反轉發生(通常表現在黑暗的地區出現更加明亮)出現在標本相差 對比圖像 窗口。 試樣的對比變化將滑塊同時產生,波的振幅圖,直接定位的相差板的上麵,展示在環繞波振幅降低(紅色曲線)的變化相對於所得到的(或顆粒,綠色曲線)波。 光的衍射波的振幅保持不變,不 管的相差板的特點,是由藍色曲線表明。

在光傳輸和物鏡相板的延遲值的變化可以產生廣泛的影響,在非常低的對比度(接近明場照明)的一個偽暗視野的影響。 對於大多數標本,最好的結果介於兩個極端之間,對折射率和厚度的整個試樣脈動值的亮度,平滑的灰度生產。 此外,薄的標本往往會以不同的方式比較厚的標本,觀察時,在相同的延遲(或環繞波的進步)和相差板的中性密度(傳輸衰減)值。

本教程比較常見的兩種物鏡相板構型的影響。 暗相差板( DL )規範是一個四分之一波長延遲值和中性密度平均水平的生產,導致試樣的對比,落在中間的範圍。 DL物鏡產生淺灰色背景暗圖像的輪廓,並利用通用的相差對比觀察典型的物鏡。 這些物鏡的物鏡是提供在與周圍介質的折射率的一個主要區別標本中最強的暗對比。 DL相對比的物鏡是用於細胞和其他半透明的生活資料的審查最流行的款式,特別適合於顯微數字成像。

另外, 暗( DM )相差板配置有一個較小的環繞波的延遲值(約八分之一個波長),但更高的中性密度比暗低板。 暗的相差板生產中灰色背景暗圖像的輪廓。 這些物鏡是設計用來與具有小的相移和折射率的差異的標本實現高圖像對比度,如細纖維,鞭毛,纖毛,顆粒,和非常小的顆粒。 通常限製在高放大倍率的物鏡具有大的數值孔徑(螢石和消色差透鏡),用非常薄的標本進行DM相對比,但往往顯示一個反轉的對比時,厚的樣品(標本具有非常高的折射率)成像。

在相差顯微鏡下觀察圖像強度(或記錄或數字或與傳統的電影)不承擔一個簡單的線性關係,對試樣的光學路徑差。 這個概念是如圖1所示,它顯示相對試樣強度作為陽性對照的相差板有一個固定的延遲值的函數的相差變化(90度)和不同程度的中性密度。 紅色曲線與 暗( DM )物鏡,而黃色曲線接近黑暗的低( DL )物鏡。 藍色曲線提出了一種無中性密度相差板加,和模仿的明物鏡在90度的相差變化(見圖1)。 標本陷入圖1的灰色區域比背景暗,和那些在白色區域比背景更輕。

對比的是更大的在較小的光程差與具有較高的中性密度值的物鏡(紅色曲線;DM物鏡),但較厚的標本進行對比度反轉在低得多的路徑的差異(約50度延遲)。 作為一個結果,解釋圖像可以用厚的樣品,當采用暗介質相對比的物鏡是困難的。 例如,精細胞的纖毛具有折射率隻比周圍介質略高(約15度延遲)將出現深灰色。 然而,較厚的特點,如細胞核或較大的細胞器,具有延遲值的百分之60左右,經驗對比反演和出現在黑暗的背景很亮。 檢查時具有中性密度百分之25相差物鏡(黃色曲線),同一標本有一個細胞核,比纖毛深。 戲劇性的對比這些差異可能導致細胞形態完全不同的解釋。



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