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新聞資訊

徠卡顯微鏡熒光染料

2014-10-15  發布者:admin 

 在熒光顯微鏡的基本原理是細胞成分有熒光劑的幫助的非常具體的可視化。這可以是熒光蛋白 - 例如綠色熒光蛋白 - 基因與感興趣的蛋白質。如果克隆是不可能的 - 例如組織學標本中 - 這是需要使用其他技術,如免疫熒光染色來可視化目的蛋白質。用於此目的的抗體的利用,這是可以直接或間接地連接到不同的熒光染料和結合到適當的目標結構。此外,與熒光染料的徠卡顯微鏡的幫助下,不僅限於蛋白,但它也提供了機會染色核酸,多糖和其他結構。可以檢測甚至非生物物質,如鈣離子。本文介紹了常用的熒光劑。


熒光免疫

在熒光顯微鏡有兩種方式來可視化你的目標蛋白。無論是與一個固有熒光信號的幫助下 - 這意味著通過克隆,因此基因連接的熒光蛋白與靶蛋白。或借助熒光標記的特異性結合到感興趣的蛋白質的抗體。對於一些生物的問題是比較有用的,甚至需要進行後者。在組織學樣品的情況下,例如,它不可能使用的,因為在一般的樣品被從其中不持有任何熒光蛋白的生物來源的熒光蛋白。此外,如果一個有效的抗體可用,免疫比熒光蛋白技術快得多,是你要克隆的興趣和轉染的DNA的基因插入到適當的細胞。熒光蛋白的另一個缺點在於身為蛋白質本身的性質。有了它,它們具有可導致功能障礙或誤解關於感興趣的附著蛋白的細胞內特定蛋白質性的特點。然而,應當認為,使用熒光蛋白是通常選擇的方法來觀察活細胞。 

免疫熒光法利用抗體與其抗原的非常特異性結合親和力的。這可以有兩種不同的外觀。最簡單的方法是使用一種被結合到感興趣的蛋白的熒光標記的抗體。這就是所謂的直接免疫熒光。 

 

在大多數情況下,有兩種形式的抗體的使用。第一個結合靶蛋白並沒有熒光標記本身(第一抗體)。但是,第二個(第二抗體),其結合第一抗體特異性帶有熒光染料。這種方法被稱為間接免疫熒光和具有若幹優點。一方麵有一個放大的效果,因為多於一個的第二抗體結合於一個第一抗體。另一方麵,沒有必要所有的時間標記每個抗體對您喜歡的蛋白與熒光染料而使用的商業熒光標記的第二抗體。廣泛使用的熒光染料的免疫是FITC,TRITC或都提到了以下幾個Alexa的Fluor®染料。

FITC 和TRITC

異硫氰酸熒光素(FITC)是有機熒光染料仍然在免疫熒光和流式細胞術使用。它的激發/發射峰在517分之495nm和可耦合到不同的抗體,其反應性異硫氰酸酯基,其上結合的蛋白質的氨基,巰基,咪唑基,酪氨酰基或羰基的幫助。它的基本形式 - 熒光素 - 具有332克/摩爾的摩爾質量,並經常被用來作為熒光示蹤劑。 FITC(388克/摩爾),這是用於熒光顯微鏡和服務為原點進行進一步的熒光染料類的AlexaFluor®488第一的染料之一。其熒光活性是由於其大的共軛芳族電子係統,它是由光的藍色光譜激發。

圖1:果蠅胚胎發育,綠色:FITC,紅色:TRITC       圖2:小鼠成纖維細胞,綠色F-肌動蛋白,FITC Red:Tubulin, Cy5, 藍色:細胞核,DAPI


很多時候同日而語用FITC使用的染料是它的發音相似的夥伴TRITC(四甲-5(6)-isothiocyanate)。相反,FITC,TRITC不是熒光素,但羅丹明家族的衍生物。羅丹明也有一個大的共軛芳族電子係統,是什麽導致了它們的熒光行為。相反,FITC,TRITC(478克/摩爾)為激發光在綠色光譜,最大在550nm處。其最大發射是在撒謊,在573納米。鍵合到蛋白質(如抗體)也基於反應性異硫氰酸酯基團。 

即使FITC和TRITC仍然在使用,它們是相當弱的熒光染料和不推薦用於本領域顯微鏡的狀態。他們的利潤是根據自己的經濟代價。


花青

這種相對小集合熒光染料是來自菁這也是起源於他們的名字的Cy2,Cy3,Cy5和Cy7標記。所有的人都可以通過它們的反應性基團被連接到核酸或蛋白質。對於蛋白質性標簽使用的馬來酰亞胺基團,例如。有趣的 - 有關熒光 - Cy5的是其電子周圍敏感。這可以用於酶測定。的附連蛋白導致正的或負的變化中的熒光發射的構象變化。此外Cy3和Cy5可用於FRET實驗。花青染料是比較老的熒光染料和依據其他熒光染料具有改進的亮度,耐光性,量子產率等。

Alexa Fluor®染料

Alexa Fluor®染料這是經常使用的熒光顯微鏡一大群的帶負電荷的親水性和熒光染料。他們的稱謂可追溯到它的發明者理查德·保羅·豪格蘭誰任命他的兒子亞曆克斯畢浩然後的染料。該標簽是分子探針(生命技術的附屬公司)的注冊商標。此外,各激光的激發波長中提到他們的標簽。例如在非常廣泛使用的AlexaFluor®488具有最大激發,在493納米,它允許勵磁用標準488nm的激光。 Alexa Fluor®488具有發射最大值在519納米。與此特征,Alexa Fluor®488具有非常相似的性質,以FITC。雖然Alexa Fluor®488是熒光素衍生物,而相比之下,FITC它具有更好的穩定性,亮度和較低的pH敏感性。所有的AlexaFluor®染料是不同的基本的熒光物質如熒光素,香豆素類,花青或羅丹明(如Alexa Fluor®546,Alexa Fluor®633)的磺化形式。它們的摩爾質量範圍為410至1400克/摩爾。

圖3:轉基因小鼠胚胎,interlimb體節,在10.5天的轉基因小鼠胚胎的五interlimb體節:EpaxialMyf5綠色熒光蛋白;免疫染色的GFP-Alexa的488;沾上結蛋白,Cy3的胚胎肌纖維,細胞核被發現用Hoechst大小從上到下:3.5毫米(一),800微米(B)。奧莉喬瑞,Cellules Souches與發展協會,巴斯德研究所,法國巴黎和IGBMC,IGBMC成像中心:禮貌


圖4:小鼠成纖維細胞,綠色F-肌動蛋白,FITC紅:微管蛋白,Cy5 ,藍色:細胞核的DAPI。君特·吉斯博士,馬普醫學研究所,德國海德堡:禮貌


DNA染色

熒光顯微鏡不僅蛋白質結構的利益,也有核酸。有時有必要通過其核的檢測,以確定細胞的確切位置或數量。一種最常見的DNA汙斑是DAPI(4',6 - 二脒-2 - 苯基吲哚),其結合在DNA雙螺旋結構的豐富的區域。 DAPI熒光強度增加,如果附著的DNA相比,其未綁定狀態。據興奮紫外光,最大的358納米。發射譜很廣,在461 nm的峰值。弱熒光,也可用於RNA結合檢測。在這種情況下,發射偏移到500nm。有趣的是,DAPI是能夠滲透完整的細胞膜。因此,它可以在固定,以及在活體細胞中。 

第二個廣泛使用的DNA染色方法是染料Hoechst公司,它最初是由化工企業赫斯特公司生產的家庭。赫斯特33258,赫斯特33342,和赫斯特34580頃雙 - benzimides與嵌入傾向的AT豐富的地區,於是後者不使用非常頻繁。類似DAPI它們通過紫外光激發而具有發射最大值在455納米,它被移動到510-540毫微米以未結合狀態。 Hoechst的汙漬也被細胞滲透性,可以在固定和活細胞,因此可以使用。的差異,以DAPI是其較低的毒性。

一種膜防滲的DNA染色是丙啶,碘化物。它,它通常用於在細胞培養活細胞和死細胞之間進行區分,因為它不能老是進入完整細胞。 Propidium-碘化物也嵌入劑,但沒有約束力的偏好不同的堿基。在核酸結合的狀態下,其最大激發是在538納米。最高排放為617納米。未綁定丙啶,碘激發和發射最大值被移到較低的波長和強度較低。它也可以結合RNA,而不改變它的熒光特性。區分的RNA的DNA,需要使用適當的核酸酶。 

染料,其能夠使以前無操縱的DNA和RNA之間的差是吖啶橙。它的激發/發射最大對在DNA的破解版502納米/525納米和轉向460納米/650納米的綁定RNA的狀態。此外,它能夠進入酸性隔室等溶酶體。有陽離子染料被質子化。在此酸性吖啶橙周圍被光在藍色光譜激發的,而發射是最強的橙色區域。由於細胞凋亡有很多吞沒酸性車廂這使得它經常被用來標記那些類型的細胞。


艙和細胞器的特定染料

圖5:Pukinje細胞,小鼠小腦皮質的三重標記矢狀竇旁一節。紅色:抗鈣結合蛋白-D28K/ Cy3的,綠色環保:抗GFAP/ Cy5的,藍色:赫斯特33258

圖6:牛肺血管內皮細胞。紅色:線粒體標記MitoTracker®紅CMXRos,綠色F-肌動蛋白標記的綠色熒光BODIPY®FL phallacidin,藍色:DAPI標記的細胞核。使用3D盲解卷積此圖像增強

在熒光顯微鏡中是經常合理染色細胞區室像溶酶體或內體和細胞器像線粒體。為此,有將在本節中提到的具體可用染料的調色板。

一種公知的方法來觀察線粒體是MitoTracker®的利用率。這是一種細胞滲透性染料有輕微巰基反應性氯部分。有了它,就可以通過共價鍵與半胱氨酸殘基的遊離巰基反應結合到基質蛋白。 MitoTracker®存在以不同的顏色和修改(第表1)和是Molecular Probes公司的一個注冊商標。相反,如羅丹明123或tetramethylrosamine傳統線粒體特定汙漬,MitoTracker®不破壞膜電位與固定劑後衝了出去。

根據線粒體的汙漬也有染料標記的酸性區室像溶酶體被稱為LysoTracker。這些都是鏈接到熒光膜滲透性弱堿性。很可能這些堿有,因為質子的酸性區室的親和力。 LysoTrackers也以不同的顏色(S表1)可用。

一個可比較艙溶酶體是像釀酒酵母真菌液泡。此膜的封閉空間是酸性性質也。可視化它在熒光顯微鏡中的一種方法是使用苯乙烯基染料等調頻4-64®或FM5-95®。

當涉及到蛋白分泌實驗,內質網(ER)是一種特殊的興趣。一個經典的染料來染色這個車廂是DiOC6(3)。它有一個偏好的急診室,但仍綁定到其他膜像線粒體。另一種方法特異性染色質網是用ER-跟蹤器一樣ER-跟蹤綠色和紅色。兩者都是它們與格列本脲腎上腺素類染料 - 一個sulfonylurease - 它結合到ATP敏感性鉀通道的完全駐留在ER膜。 BODIPY(硼 - 二吡咯亞甲基)描述了一組相對pH值不敏感的染料幾乎都是水不溶性的。這並沒有使他們的蛋白質標記,但脂質和膜標簽的一個很好的工具。

相鄰的車廂內質網 - 高爾基appararatus - 可以用熒光神經酰胺類似物如NBD C6-神經酰胺和BODIPY FL C5-神經酰胺。神經酰胺是鞘脂的高度富集於高爾基體。

隨著進一步基於脂質染料的幫助有可能弄髒特殊膜區域樣脂質筏。這些富含膽固醇的結構域可以通過使用NBD-6膽固醇或NBP-12膽固醇除其他(Avanti極性脂質)被可視化。 


除了使用特殊的非proteinacous熒光染料標記的細胞區室,也可以染色的與蛋白質的幫助下與偏好在小區的不同位置感興趣的區域。這些蛋白質可以被鏈接到的熒光染料和可視化的熒光顯微鏡。一個示例為這樣一種方法是麥胚凝集素(WGA)的用法,其特異性地結合於唾液酸和N-乙酰葡糖氨基存在於質膜上。 WGA被耦合到熒光染料。與之質膜可以被觀察到。


離子成像

在神經元的研究中,基因的活性或細胞運動的情況下 - 例如 - 它是感興趣了解的細胞中的離子濃度。鈉,鈣,氯離子或鎂離子具有在許多不同的細胞事件的深刻影響。通常,離子可被捕獲與熒光標記的螯合劑,當綁定到適當的離子而改變它們的光譜性質的幫助。這個原理體現在鈣指標呋喃-2,吲-1,熒光 - 3,熒光4和鈣綠,例如。 

鈉檢測,SBFI(鈉結合benzofurzanisophthalate)或綠色鈉是常用的。 PBFI(鉀結合苯並呋喃間苯二甲酸)檢測鉀離子。 

有趣的是也有基於蛋白質的鈣指標。其中之一是基於化學發光的水母蛋白水母發光蛋白。水母發光蛋白的發光團腔腸素,分子氧和Ca2 +的相互作用導致了藍色的光的釋放 - 在熒光蛋白的發現非常突出的機構。


熒光染料和它們的激發和發射波長的峰

所有上麵提到的染料列於下表中。另外附加的熒光染料,其激發和發射波長峰相提並論。

Table 1

熒光染料樣品

激發

發射

Indo-1, Ca saturated

331 nm

404 nm

Indo-1 Ca2+

346 nm

404 nm

Cascade Blue BSA pH 7.0

401 nm

419 nm

Cascade Blue

398 nm

420 nm

LysoTracker Blue

373 nm

421 nm

Alexa 405

401 nm

421 nm

LysoSensor Blue pH 5.0

374 nm

424 nm

LysoSensor Blue

374 nm

424 nm

DyLight 405

399 nm

434 nm

DyLight 350

332 nm

435 nm

BFP (Blue Fluorescent Protein)

380 nm

439 nm

Alexa 350

343 nm

441 nm

7-Amino-4-methylcoumarin pH 7.0

346 nm

442 nm

Amino Coumarin

345 nm

442 nm

AMCA conjugate

347 nm

444 nm

Coumarin

360 nm

447 nm

7-Hydroxy-4-methylcoumarin

360 nm

447 nm

7-Hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0

361 nm

448 nm

6,8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0

358 nm

450 nm

Hoechst 33342

352 nm

455 nm

Pacific Blue

404 nm

455 nm

Hoechst 33258

352 nm

455 nm

Hoechst 33258-DNA

352 nm

455 nm

Pacific Blue antibody conjugate pH 8.0

404 nm

455 nm

PO-PRO-1

434 nm

457 nm

PO-PRO-1-DNA

435 nm

457 nm

POPO-1

433 nm

457 nm

POPO-1-DNA

433 nm

458 nm

DAPI-DNA

359 nm

461 nm

DAPI

358 nm

463 nm

Marina Blue

362 nm

464 nm

SYTOX Blue-DNA

445 nm

470 nm

CFP (Cyan Fluorescent Protein)

434 nm

474 nm

eCFP (Enhanced Cyan Fluorescent Protein)

437 nm

476 nm

1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid (1,8-ANS)

375 nm

479 nm

Indo-1, Ca free

346 nm

479 nm

1,8-ANS (1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid)

375 nm

480 nm

BO-PRO-1-DNA

462 nm

482 nm

BOPRO-1

462 nm

482 nm

BOBO-1-DNA

461 nm

484 nm

SYTO 45-DNA

451 nm

486 nm

evoglow-Pp1

448 nm

495 nm

evoglow-Bs1

448 nm

496 nm

evoglow-Bs2

448 nm

496 nm

Auramine O

431 nm

501 nm

DiO

487 nm

501 nm

LysoSensor Green pH 5.0

447 nm

502 nm

Cy 2

489 nm

503 nm

LysoSensor Green

447 nm

504 nm

Fura-2, high Ca

336 nm

504 nm

Fura-2 Ca2+sup>

336 nm

505 nm

SYTO 13-DNA

488 nm

506 nm

YO-PRO-1-DNA

491 nm

507 nm

YOYO-1-DNA

491 nm

509 nm

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein)

488 nm

509 nm

LysoTracker Green

503 nm

509 nm

GFP (S65T)

489 nm

509 nm

BODIPY FL, MeOH

502 nm

511 nm

Sapphire

396 nm

511 nm

BODIPY FL conjugate

503 nm

512 nm

MitoTracker Green

490 nm

512 nm

MitoTracker Green FM, MeOH

490 nm

512 nm

Fluorescein 0.1 M NaOH

493 nm

513 nm

Calcein pH 9.0

494 nm

514 nm

Fluorescein pH 9.0

490 nm

514 nm

Calcein

493 nm

514 nm

Fura-2, no Ca

367 nm

515 nm

Fluo-4

494 nm

516 nm

FDA

495 nm

517 nm

DTAF

495 nm

517 nm

Fluorescein

495 nm

517 nm

Fluorescein antibody conjugate pH 8.0

493 nm

517 nm

CFDA

495 nm

517 nm

FITC

495 nm

517 nm

Alexa Fluor 488 hydrazide-water

493 nm

518 nm

DyLight 488

493 nm

518 nm

5-FAM pH 9.0

492 nm

518 nm

FITC antibody conjugate pH 8.0

495 nm

519 nm

Alexa 488

493 nm

520 nm

Rhodamine 110

497 nm

520 nm

Rhodamine 110 pH 7.0

497 nm

520 nm

Acridine Orange

431 nm

520 nm

Alexa Fluor 488 antibody conjugate pH 8.0

499 nm

520 nm

BCECF pH 5.5

485 nm

521 nm

PicoGreendsDNA quantitation reagent

502 nm

522 nm

SYBR Green I

498 nm

522 nm

Rhodaminen Green pH 7.0

497 nm

523 nm

CyQUANT GR-DNA

502 nm

523 nm

NeuroTrace 500/525, green fluorescent Nissl stain-RNA

497 nm

524 nm

DansylCadaverine

335 nm

524 nm

Rhodol Green antibody conjugate pH 8.0

499 nm

524 nm

Fluoro-Emerald

495 nm

524 nm

Nissl

497 nm

524 nm

Fluorescein dextran pH 8.0

501 nm

524 nm

Rhodamine Green

497 nm

524 nm

5-(and-6)-Carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein pH 9.0

504 nm

525 nm

DansylCadaverine, MeOH

335 nm

526 nm

eYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein)

514 nm

526 nm

Oregon Green 488

498 nm

526 nm

Oregon Green 488 antibody conjugate pH 8.0

498 nm

526 nm

Fluo-3

506 nm

527 nm

BCECF pH 9.0

501 nm

527 nm

SBFI-Na+

336 nm

527 nm

Fluo-3 Ca2+

506 nm

527 nm

Rhodamine 123, MeOH

507 nm

529 nm

FlAsH

509 nm

529 nm

Calcium Green-1 Ca2+

506 nm

529 nm

Magnesium Green

507 nm

530 nm

DM-NERF pH 4.0

493 nm

530 nm

Calcium Green

506 nm

530 nm

Citrine

515 nm

530 nm

LysoSensor Yellow pH 9.0

335 nm

530 nm

TO-PRO-1-DNA

515 nm

531 nm

Magnesium Green Mg2+

507 nm

531 nm

Sodium Green Na+

507 nm

531 nm

TOTO-1-DNA

514 nm

531 nm

Oregon Green 514

512 nm

532 nm

Oregon Green 514 antibody conjugate pH 8.0

513 nm

533 nm

NBD-X

466 nm

534 nm

DM-NERF pH 7.0

509 nm

537 nm

NBD-X, MeOH

467 nm

538 nm

CI-NERF pH 6.0

513 nm

538 nm

Alexa 430

431 nm

540 nm

Alexa Fluor 430 antibody conjugate pH 7.2

431 nm

540 nm

CI-NERF pH 2.5

504 nm

541 nm

Lucifer Yellow, CH

428 nm

542 nm

LysoSensor Yellow pH 3.0

389 nm

542 nm

6-TET, SE pH 9.0

521 nm

542 nm

Eosin antibody conjugate pH 8.0

525 nm

546 nm

Eosin

524 nm

546 nm

6-Carboxyrhodamine 6G pH 7.0

526 nm

547 nm

6-Carboxyrhodamine 6G, hydrochloride

525 nm

547 nm

Bodipy R6G SE

528 nm

547 nm

BODIPY R6G, MeOH

528 nm

547 nm

6 JOE

520 nm

548 nm

Cascade Yellow antibody conjugate pH 8.0

399 nm

549 nm

Cascade Yellow

399 nm

549 nm

mBanana

540 nm

553 nm

Alexa Fluor 532 antibody conjugate pH 7.2

528 nm

553 nm

Alexa 532

528 nm

553 nm

Erythrosin-5-isothiocyanate pH 9.0

533 nm

554 nm

6-HEX, SE pH 9.0

534 nm

559 nm

mOrange

548 nm

562 nm

mHoneydew

478 nm

562 nm

Cy 3

549 nm

562 nm

Rhodamine B

543 nm

565 nm

DiI

551 nm

565 nm

5-TAMRA-MeOH

543 nm

567 nm

Alexa 555

553 nm

568 nm

Alexa Fluor 555 antibody conjugate pH 7.2

553 nm

568 nm

DyLight 549

555 nm

569 nm

BODIPY TMR-X, SE

544 nm

570 nm

BODIPY TMR-X, MeOH

544 nm

570 nm

PO-PRO-3-DNA

539 nm

571 nm

PO-PRO-3

539 nm

571 nm

Rhodamine

551 nm

573 nm

Bodipy TMR-X conjugate

544 nm

573 nm

POPO-3

533 nm

573 nm

Alexa 546

562 nm

573 nm

BODIPY TMR-X antibody conjugate pH 7.2

544 nm

573 nm

Calcium Orange Ca2+

549 nm

573 nm

TRITC

550 nm

573 nm

Calcium Orange

549 nm

574 nm

Rhodaminephalloidin pH 7.0

558 nm

575 nm

MitoTracker Orange

551 nm

575 nm

MitoTracker Orange, MeOH

551 nm

575 nm

Phycoerythrin

565 nm

575 nm

Magnesium Orange

550 nm

575 nm

R-Phycoerythrin pH 7.5

565 nm

576 nm

5-TAMRA pH 7.0

553 nm

576 nm

5-TAMRA

549 nm

577 nm

Rhod-2

552 nm

577 nm

FM 1-43

472 nm

578 nm

Rhod-2 Ca2+

553 nm

578 nm

Tetramethylrhodamine antibody conjugate pH 8.0

552 nm

578 nm

FM 1-43 lipid

473 nm

579 nm

LOLO-1-DNA

568 nm

580 nm

dTomato

554 nm

581 nm

DsRed

563 nm

581 nm

Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide

372 nm

582 nm

Tetramethylrhodamine dextran pH 7.0

555 nm

582 nm

Fluor-Ruby

554 nm

582 nm

Resorufin

571 nm

584 nm

Resorufin pH 9.0

571 nm

584 nm

mTangerine

568 nm

585 nm

LysoTracker Red

578 nm

589 nm

Lissaminerhodamine

572 nm

590 nm

Cy 3.5

578 nm

591 nm

Rhodamine Red-X antibody conjugate pH 8.0

573 nm

591 nm

Sulforhodamine 101, EtOH

578 nm

593 nm

JC-1 pH 8.2

593 nm

595 nm

JC-1

592 nm

595 nm

mStrawberry

575 nm

596 nm

MitoTracker Red

578 nm

599 nm

MitoTracker Red, MeOH

578 nm

599 nm

X-Rhod-1 Ca2+

580 nm

602 nm

Alexa Fluor 568 antibody conjugate pH 7.2

579 nm

603 nm

Alexa 568

576 nm

603 nm

5-ROX pH 7.0

578 nm

604 nm

5-ROX (5-Carboxy-X-rhodamine, triethylammonium salt)

578 nm

604 nm

BO-PRO-3-DNA

574 nm

604 nm

BOPRO-3

574 nm

604 nm

BOBO-3-DNA

570 nm

605 nm

Ethidium Bromide

524 nm

605 nm

ReAsH

597 nm

608 nm

Calcium Crimson

589 nm

608 nm

Calcium Crimson Ca2+

590 nm

608 nm

mRFP

585 nm

608 nm

mCherry

587 nm

610 nm

Texas Red-X antibody conjugate pH 7.2

596 nm

613 nm

HcRed

590 nm

614 nm

DyLight 594

592 nm

616 nm

Ethidium homodimer-1-DNA

528 nm

617 nm

Ethidiumhomodimer

528 nm

617 nm

Propidium Iodide

538 nm

617 nm

SYPRO Ruby

467 nm

618 nm

Propidium Iodide-DNA

538 nm

619 nm

Alexa 594

590 nm

619 nm

BODIPY TR-X, SE

588 nm

621 nm

BODIPY TR-X, MeOH

588 nm

621 nm

BODIPY TR-X phallacidin pH 7.0

590 nm

621 nm

Alexa Fluor 610 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

567 nm

627 nm

YO-PRO-3-DNA

613 nm

629 nm

Di-8 ANEPPS

469 nm

630 nm

Di-8-ANEPPS-lipid

469 nm

631 nm

YOYO-3-DNA

612 nm

631 nm

Nile Red-lipid

553 nm

636 nm

Nile Red

559 nm

637 nm

DyLight 633

624 nm

646 nm

mPlum

587 nm

649 nm

TO-PRO-3-DNA

642 nm

657 nm

DDAO pH 9.0

648 nm

657 nm

Fura Red, high Ca

434 nm

659 nm

Allophycocyanin pH 7.5

651 nm

660 nm

APC (allophycocyanin)

650 nm

660 nm

Nile Blue, EtOH

631 nm

660 nm

TOTO-3-DNA

642 nm

661 nm

Cy 5

646 nm

664 nm

BODIPY 650/665-X, MeOH

646 nm

664 nm

Alexa Fluor 647 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2

569 nm

666 nm

DyLight 649

652 nm

668 nm

Alexa Fluor 647 antibody conjugate pH 7.2

653 nm

668 nm

Alexa 647

653 nm

669 nm

Fura Red Ca2+

435 nm

670 nm

Atto 647

644 nm

670 nm

Fura Red, low Ca

472 nm

673 nm

Carboxynaphthofluorescein pH 10.0

600 nm

674 nm

Alexa 660

664 nm

691 nm

Alexa Fluor 660 antibody conjugate pH 7.2

663 nm

691 nm

Cy 5.5

673 nm

692 nm

Alexa Fluor 680 antibody conjugate pH 7.2

679 nm

702 nm

Alexa 680

679 nm

703 nm

DyLight 680

678 nm

706 nm

Alexa Fluor 700 antibody conjugate pH 7.2

696 nm

719 nm

Alexa 700

696 nm

720 nm

FM 4-64, 2% CHAPS

506 nm

751 nm

FM 4-64

508 nm

751 nm

 



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