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奧林巴斯顯微鏡熒光漂白學術

2014-10-23  發布者:admin 

在光漂白(FLIP)兩者熒光丟失和恢複的光漂白(FRAP)後的相關方法是技術通過熒光的光漂白觀察細胞內的物質的移動。浮動熒光染料在細胞膜上的特定區域,細胞器(內質網和高爾基體)膜,或這些膜浮動熒光標記蛋白是漂白,損失或熒光的恢複觀察,研究流動性橫向方向上(參見圖1)。被FLIP和FRAP的技術也可以用來確認膜的連續性。

最近的一項研究被進行,其中細胞骨架蛋白標記的熒光染料,以確認構成微管和中等尺寸的長絲(10納米細絲)發生蛋白如何周轉(替換)(Wikstrom等人,1992)。在本研究中提出的技術可以被用於確定是否FLIP發生在末端或在長絲的中間。 

奧林巴斯顯微鏡用FLIP和FRAP實驗最近變得更容易進行,由於使用綠色熒光蛋白(兩性平等問題協調)的。兩性平等問題協調可以在細胞中表達為融合蛋白與靶蛋白。前兩性平等問題協調成為可能,此類蛋白的行為中所需要的細胞骨架蛋白,觀察到純化,熒光標記和導入細胞通過顯微注射的方法。

光漂白的熒光損失

細胞器膜中,包括內質網,高爾基體和細胞核的細胞的連續性已被翻轉驗證。後所感興趣的區域已被光漂白,熒光迅速被擴散的方法回收。當在同一地區已多次漂白,整個細胞器膜的熒光消失,表明熒光浮在細胞器膜。

熒光漂白後恢複

一種熒光染料預先綴合與靶蛋白分子或脂質膜被漂白時的試樣中感興趣的區域和FRAP是用來觀察由擴散的手段,通過染料周轉如何在漂白的部分的熒光恢複。




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