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新聞資訊

尼康顯微鏡紫外激發塊組

2014-10-28  發布者:admin 

包括在尼康顯微鏡紫外線激發熒光濾波器圖集四個包含任一的帶通或長通發射(阻擋)能夠通過任一窄或寬的藍色,綠色和紅色的可見光波長區域中,選擇性分離熒光發射濾光片小心平衡組合。這些過濾器的組合包括330和380納米的帶10的通帶寬度分布,40,和50毫微米之間的激發波長範圍內。三組合的采用相同的二色鏡,而第四組具有較低的波長切於一個反射鏡,用它的較窄的激發帶重合。紫外線過濾套包含任長通或帶通單發射濾光片。

紫外線過濾器集的性能可以通過從與每個個體濾光片組合的捕獲的同一視場的圖像進行比較來判斷,如圖1所示的檢體是從小鼠腎髒獲得的並用薄的冷凍切片的組織切片(16微米)三種熒光團的組合。腎小球的薄款元素和曲小管被標記的Alexa Fluor488(綠色發光),麥胚凝集素。絲狀肌動蛋白居住在腎小球和刷狀緣染色的Alexa Fluor568(紅色發射)鬼筆環肽,而在細胞核中的DNA counterstained用DAPI(藍色發光),從而完善了標識製度。 

尼康紫外線激發一係列的孤帶通濾波器的發射,在UV-2E/ C,產生在漆黑的背景,深藍色的彩色圖像(圖1(a)),並非常適用於多色熒光成像使用與其他激發塊組合。在UV-2E/ C組合的帶通發射濾波器消除了熒光,從紅色和綠色的熒光團在樣品標記有多個探針。在UV-1A濾波器組合(圖1(b))中包含一個很窄的激發帶(10納米),其與由普通電弧放電燈所產生的汞i線(365納米)的波長一致。該過濾器組合的目的是通過一個窄帶通激發區域盡量減少自體熒光,同時通過了所有的發射波長超過420納米。在UV-1A濾波器組中的二色鏡具有最短的截止波長(380納米)的紫外線係列。

通常被稱為標準的紫外組中,UV-2A組合配有50納米的帶通濾波器激勵覆蓋最長波長紫外區域的。 耦合到一個400納米的截止二色鏡和一個長通發射濾波器中,UV-2A產生的任何過濾器組合的最亮的圖象在Nikon紫外線集(圖1(c))。 UV-2B是在配置文件中的UV-2A相似,但配備有一個較長的切口上波長(紅移由15納米)的屏障過濾器,以減少背景熒光。 時相比,UV-2A(圖1(c)和圖1(d)),在UV-2B產生暗得多的背景與優越的整體圖像的對比度。 規格從各種尼康紫外濾光片組合的二色性反射鏡和過濾器都列在表1中。

尼康紫外線過濾組合規格

濾鏡套裝 

  描述


激發濾光片(nm)

雙色鏡 (nm)

屏障過濾 (nm)

備注

UV-1A

365/10
  (360-370)

380 (LP)

420 (LP)

Narrow Excitation Band
  Longpass Barrier Filter

UV-2A

355/50
  (330-380)

400 (LP)

420 (LP)

Standard UV Cube
  Longpass Barrier Filter

UV-2B

355/50
  (330-380)

400 (LP)

435 (LP)

Darker Background
  Longpass Barrier Filter

UV-2E/C

360/40
  (340-380)

400 (LP)

460/50
  (435-485)

Medium Excitation Band
  Bandpass Barrier Filter

表1

  • UV-2E/C - 在UV-2E/ C濾波器組合設計為紫外熒光銳截止濾波器模塊。過濾器是軟塗敷型旨在產生高信/噪比。在這種組合中使用的窄帶通阻擋濾波器被設計為顯著地減少或完全消除綠色和紅色可見光的波長。

  • UV-1A - UV-1A組合被設計為紫外熒光具有窄的激發帶通(僅 i -line汞光譜的利用)和窄的二色鏡的通帶,其最小化的自體熒光和光漂白濾波器塊。

  • UV-2A -在 UV-2A濾波器組合設計為紫外熒光標準的過濾塊,是最亮的紫外線過濾器尼康調色板設置。

  • UV-2B - UV-2B的組合被設計成用於紫外熒光,提供了一個更暗的背景和比UV-2A濾波器組合更好的對比度的通用濾波器塊。

熒光團的寬陣列已經開發出用激發波長範圍從紫外區域的調查。 Catalogued表2是一些最流行的染料和熒光探針可以與尼康紫外線過濾器的組合來可視化的。 本地化的環境顯著影響熒光團的吸收光譜和發射光譜的最大值(峰值)波長的光,因此在表2中給出的值可能與實驗條件而變化。 此列表僅旨在作為濾波器和熒光基團的選擇的引導,而不應被認為是詳盡的或窮盡的匯編。 許多包含在表2中的熒光探針是專有的,已經開發了以最小化,同時確保了熒光染料的吸收和發射光譜以及普通熒光濾光器的組合之間的最大程度的重疊光漂白。 注意,由於寬的吸收和發射帶,數在表2中列出的熒光探針也適合於與具有紫色和藍紫色激發帶通區域的過濾器組合使用。

熒光紫外激發光譜曲線

熒光染料

激發波長(納米)

發射波長  (納米)

推薦的濾波器組合(s)

Acridine Blue

362

462

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

AFA (Acriflavin Feulgen   SITSA)

355-425

460

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Alexa Fluor 350

346

442

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Alexa Fluor 405

401

421

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

AMCA (Aminomethylcoumarin   Acetic Acid)

345

445

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

AMCA-X (AMCA Succinimidyl   Ester)

353

442

All

Aminoquinoline

355

550

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

Aniline Blue

370

509

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

ANS (Anilinonaphthalene   Sulfonic Acid)

372

455

All

Anthroyl Stearate

371

446

All

BAO 9   (Bisaminophenyloxadiazole)

365

395

UV-1A, UV-2A

BFP (Blue Fluorescent   Protein)

380

440

All

Bisbenzamide

360

605

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Blancophor SV

370

435

All

Blue FluoSpheres

350

440

All

Blue FluoSpheres (Short   Wavelength)

365

415

UV-1A, UV-2A

Calcein Blue

370-375

420-435

All

Calcofluor RW

370

440

All

Calcofluor White (Standard   Solution)

365

435

All

Cascade Blue

370

425

UV-1A, UV-2A

Cascade Yellow

402

545

UV-1A, UV-2A

CCF2 (GeneBLAzer)

402

520

UV-1A, UV-2A

CellTracker Blue Dyes
  (Aminochloromethylcoumarins)

354-372

466-470

All

CPM Probes (Maleimide   Coumarins)

375-385

460-475

All

DANS   (Dimethylaminonaphthalene)

340

525

UV-2A, UV-2B

DANSA (Diamidinonaphthyl   Sulfonic Acid)

360

430

UV-1A, UV-2A

Dansyl Probes

335-380

475-575

All

DAPI (Diamidinophenylindole)

358

461

All

Dapoxyl Probes

375-400

575-600

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

DIDS   (Diisothiocyanatostilbene Disulfonic Acid)

341

415

UV-1A, UV-2A

Dimethylamino Sulfonic Acid

340

520

UV-2A, UV-2B

DIPI   (Bisimidazolinylphenylindole)

364

455

UV-2A, UV-2B

Dopamine

340

490-520

UV-2A, UV-2B

DPH (Diphenylhexatriene)

350

452

UV-2A, UV-2B

ELF-97 Alcohol

345

530

UV-2A, UV-2B

EBFP (Enhanced Blue FP)

380

440

All

ERTracker Blue/White DPX

374

575

UV-2A, UV-2B

Fast Blue

360

410

UV-1A, UV-2A

Flazo Orange

375-530

612

UV-1A, UV-2A

Fluorescamine

390

460-475

UV-2A, UV-2B

FluoroGold   (Hydroxystilbamidine)

365 (High pH)
  325 (Low pH)

565 (High pH)
  410 (Low pH)

All

Fura-2

335 (High Ca)
  365 (Low Ca)

505 (High Ca)
  512 (Low Ca)

UV-2A, UV-2B

GFP (Blue Shifted, Y66H)

382

448

UV-2A, UV-2B

GFP (Wild Type)

395

508

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

Gloxalic Acid

405

460

UV-2A, UV-2B

Granular Blue

355

425

UV-1A, UV-2A

Hoechst 33258

346

460

All

Hoechst 33342

347

483

All

Hoechst 34580

392

440

All

HPTS (Hydroxypyrene   Trisulfonic Acid)

355

465

All

Hydroxymethylcoumarin
  (Methylumbelliferone)

360

455

All

HAT (Hydroxytryptamine)

370-415

520-540

All

IAEDANS
  (Iodoacetylaminonaphthalene Sulfonic Acid)

336

482

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Indo-1

330 (High Ca)
  346 (Low Ca)

405 (High Ca)
  475 (Low Ca)

All

Intrawhite CF

360

430

UV-1A, UV-2A

Laurdan

364

497

All

Leucophors

370-395

430-465

All

LysoSensor Blue

373

425

UV-1A, UV-2A

LysoSensor Yellow/Blue

329 (High pH)
  384 (Low pH)

440 (High pH)
  540 (Low pH)

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

LysoTracker Blue

373

422

UV-1A, UV-2A

MAG Probes (Magnesium   Indicators)

330-350

420-505

UV-2A, UV-2B

Marina Blue

365

460

All

Methoxycoumarins

340-365

400-470

All

Monochlorobimane

380

461

UV-2A, UV-2B

MPS (Methyl Green Pyronine   Stilbene)

364

395

UV-1A, UV-2A

Noradrenaline

340

505

UV-2A, UV-2B

Nuclear Fast Red

289-530

580

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

Nuclear Yellow

365

495

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

OPT (o-Phthalaldehyde)

340

455

UV-2A, UV-2B

PBFI (Potassium Probe)

334 (High K)
  346 (Low K)

525 (High K)
  551 (Low K)

UV-2A, UV-2B

Phorwites

360-380

430

All

PMIA (Pyrenemethyl   Iodoacetate)

341

376

UV-1A

Prodan

361

498

All

Pyrene

345

378

UV-1A

Pyrozal Brilliant Flavin 7GF

365

495

UV-1A, UV-2A
  UV-2B

QDots 525-655

350-450

525-655

UV-2A, UV-2B

Quin-2 (Calcium Probe)

332 (High Ca)
  352 (Low Ca)

492 (High Ca)
  492 (Low Ca)

UV-2A, UV-2B

SBFI (Sodium Probe)

334 (High Na)
  346 (Low Na)

525 (High Na)
  551 (Low Na)

UV-2A, UV-2B

Serotonin

365

530

UV-2A, UV-2B

SITS (Stilbene   Isothiosesulphonic Acid)

337

436

UV-2A, UV-2B

SPQ   (Methoxysulfopropylquinolinium)

344

443

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Stilbene

335

440

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Tetracycline

390

560

UV-2A, UV-2B

Thioflavin TCN

350

460

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

Thiolyte

380

480

All

Tinopol CBS

390

430

UV-2A, UV-2B
  UV-2E/C

True Blue

365

425

UV-1A, UV-2A

Uvitex SFC

365

435

All

表2

雖然如上所述充分的多數用紫外線波長的調查服務的四個過濾器的組合,若幹附加的特殊過濾器組可從廠家售後。 激發在250和300納米之間的波長區域的熒光團可使用過濾器的組合,包括集中在這個區域的帶通濾波器的激勵。 這些組合還需要二色鏡和屏障過濾器與切口對在紫外區域的波長(以及檢測器對紫外線敏感)。 設計用於氙弧放電燈激勵濾波器組包含集中在300到400納米的區域寬的帶通激發濾光片(約100納米)。

其他專門的過濾器組包含發射濾波器具有兩個帶通區域為離子敏感的探針,如Indo-1, FluoroGold, Fura-2,和LysoSensor染料的比率的分析。其他套結合的窄水銀i線(365納米)的帶通濾波器的激發帶的帶通發射濾波器專門用於染料如DAPI, Hoechst 33258量身定做(通過合並的UV-2E/ C和UV-1A組合的元素。生產),和AMCA。此外,已經開發了用於特定熒光團的濾波器的組合。間設計的芘這些組合,ELF-97,核固紅,SPQ,瀑布藍和金探針。有長通濾波器截止波長上的黃色光譜區域過濾器集是用於檢查殘留的光致抗蝕劑在半導體晶片上是有用的。




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