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新聞資訊

尼康顯微鏡綠色激發塊

2014-11-17  發布者:admin 

包括在尼康綠色激發熒光激發塊組合是6包含任一的帶通或長通發射(阻擋)濾波器能夠通過任一窄或寬的黃色,橙色的頻帶選擇性地分離的熒光發射,紅和近紅外小心平衡組合光譜區。這個交互式指南探討了變化的激發和發射濾光器的光譜分布,以及這些的二色鏡,如何影響的信號電平,整體過濾器的性能,並在設計用於在綠色區域的熒光團的激發的組合圖像的對比度。

教程初始化與隨機選擇的熒光檢體中出現的標本圖像窗口和帶通發射(Cy3標記 ;在所顯示的綠色激發濾光片組合頻譜輪廓缺省)濾波器組譜概況圖。將合並的過濾器的透射和反射光譜被疊加在用於標記的樣品(熒光光譜曲線中不包含自身熒光植物標本)的吸收綠色熒光團的吸收光譜和發射光譜。熒光團的吸收光譜示於使用褐色填充的教程,而相應的發射光譜表示用灰色填充。由指定的過濾器組合的波長特性過濾器設置滑塊將顯示在本教程的右下角的角落的黃色框。這些值被不斷地更新作為滑板平移由左到右。

為了操作的教程,使用過濾器設置滑塊可用於綠色激發各種過濾器組合之間進行轉換。當滑塊從左向右平移,激發和阻擋濾光片的光譜分布,以及該二色鏡的,被修飾以模擬變化的光譜圖。需要注意的是連續變化的光譜曲線,但並不意味著任何過濾器的組合是可能的,也不是單獨的過濾器設置可變的(無物理變化的過濾器)的問候的光譜曲線。的選擇的濾波器組之間的頻譜分布的變化簡單地用來幫助建立在每個光學塊中使用的過濾器的組合之間的關係。

個別過濾光譜(激發,發射和二色鏡),可以添加或刪除的過濾器設置光譜範圍選擇或取消選擇相應的複選框,圖形下方的曲線圖。此外,該熒光團的吸收光譜和發射光譜可以被添加或與一組類似的複選框(除去譜截麵)。檢體圖像同時改變與過濾器配置文件以反映變化由改變到由滑塊的翻譯所產生的過濾器的組合產生的對比度和信號電平。新的標本可以在任何時候選擇使用選擇的樣本下拉菜單,用來標記選定樣本的熒光基團直接列在菜單框下方。在許多情況下,將樣品粘有兩個或更多的熒光探針以證明熒光帶通和長通屏障(發射)過濾套的選擇性分離。

尼康綠色熒光濾光片組合包括510和560納米的帶10,25,30,和50納米的通帶寬度輪廓(包括窄,中,寬激發帶)之間的激發波長範圍內。三組合的使用相同的二色鏡(565納米),而其它三個具有較高的波長截止點的值(570或575納米)的反射鏡。兩個六種尼康綠色激發濾光片套結合帶通阻濾波器具有60和75納米的帶寬。

兩者的尼康綠色激發濾光片套結合的帶通發射(阻擋)濾波器旨在減少或消除從熒光團發射紅光或近紅外光譜區中的樣品標記有多個探針的幹擾。在G-2E / C組結合了狹窄的激發帶(25納米)與60納米的發射帶通。Cy3標記的組合(尼康的成員HYQ濾波器組)包括類似的組件,但具有更寬的帶通的激發和發射濾波器(30和75納米,分別地),並用二色鏡切口上的570納米的波長相比為565納米的價值G-2E / C組。既利用帶通發射濾波器的套適於與四甲基羅丹明異硫氰酸酯(用TRITC)和Cy3標記,具有590-650納米的帶通範圍內的G-2E / C組和573-648納米的Cy3標記的組合。使用所產生的圖像的Cy3組具有更多的黃色外觀,體現的發射帶通到較低的波長的擴展,並且圖像是明亮一些由於從更寬的帶通值產生的更大的激發和發射能量。

尼康顯微鏡G-1AG-1B濾波器組合具有非常相似的光學元件,並且可以被認為是本質上可互換的。其主要應用是汞弧光放電燈供選擇的546納米的綠光發射線。兩者都配備有窄10納米的通帶激發濾波器(541-551納米),以盡量減少自體熒光,但在他們的二色性反射鏡和屏障(發射)濾波器的截止點的波長有所不同。在G-1A組有二色鏡切對575納米的波長,加上580納米(切上)的發射濾波器。在G-1B濾波器組采用低波長二色鏡(565納米)中有較高的發射波長過濾器(590納米)的組合。鏡和發射濾光片波長值之間的增加的波長間隔為G-1B組相比,G-1A可能導致與一些熒光染料顯著圖像的差異。此外,較高的發射濾波器切上不包括黃色的波長和導致更偏紅的圖像外觀上與G-1B濾波器的組合。

考慮到標準的綠色激發濾光片組中,G-2A采用組合激發濾波器,寬50納米的通頻帶(510-560納米),涵蓋最綠色的光譜區域。在長通屏障過濾器通過從一個大的範圍內,在波長超過590納米的截止點發出(橙色通過近紅外線)的熒光發射。在所用的二色鏡的G-2A組具有565納米的截止波長。類似的過濾器設置,G-2B組合采用相同的激發濾光片(50納米帶通)作為G-2A,但有一個10納米的波長更長的二色鏡切割上(575納米),再加上一個長通屏障過濾器是由20納米偏向紅色光譜區域,以610納米。與所產生的圖像的G-2B組具有比從較暗的背景的G-2A,並且還出現更偏紅由於增加了排放切口上的波長,其中不包括更黃橙色發光。

尼康綠色激發濾光片組合規格

濾鏡套裝描述

激發濾光片(nm)

雙色鏡 (nm)

二次濾光 (nm)

備注

G-1A

546/10
  (541-551)

575 (LP)

580 (LP)

Narrow Excitation Band
  Longpass Barrier Filter

G-1B

546/10
  (541-551)

565 (LP)

590 (LP)

Narrow Excitation Band
  Longpass Barrier Filter

G-2A

535/50
  (510-560)

565 (LP)

590 (LP)

Standard G Set
  Longpass Barrier Filter

G-2B

535/50
  (510-560)

575 (LP)

610 (LP)

Darker Background
  Longpass Barrier Filter

G-2E/C

540/25
  (528-553)

565 (LP)

620/60
  (590-650)

Narrow Excitation Band
  Bandpass Barrier Filter

CY3

545/30
  (530-560)

570 (LP)

610/75
  (573-648)

Medium Excitation Band
  Bandpass Barrier Filter

表1
  • G-1A -G-1A為綠色波長的激發濾光器的組合被設計為具有窄的激發帶通,以減少自發熒光和最小化樣品的輻射暴露。的長通屏障(發射)濾波器能夠從黃色,橙色和紅色發射具有在中心的綠色波長區域顯著吸收熒光團發射的信號。

  • G-1B -G-1B濾鏡組合也有類似的組件配置文件的G-1A組,結合了狹窄的激發帶通,以減少自體熒光和試件破壞,但具有不同的二色鏡和發射濾波器截止波長上。切到更長的波長的發射濾波器的移位產生的,由於黃色發射的增加的阻擋出現偏紅的圖像。

  • G-2A -G-2A濾波器組合被配置為在標準的綠色過濾器塊中,具有寬的激發帶通應用到大量的熒光團通過綠色波長激活的。的長通發射濾波器允許檢測所有熒光波長長於黃色光譜區域。

  • G-2B -G-2B濾波器組合設計具有相同的勵磁特性的G-2A濾波器模塊。然而,較高的二色鏡和發射濾波器截止波長上,在G-2B組產生具有較深的背景和顏色轉向紅色的圖像。

  • G-2E / C -G-2E / C濾波器組合設計與許多流行的熒光探針是在多標記實驗中使用的最佳性能。一條狹窄的激發帶通提供了選擇性激勵,而帶通濾波器的排放減少了從熒光發射紅光和近紅外幹擾。

  • Cy3(HYQ) -該Cy3的綠色激發濾光片組合在結構上類似G-2E / C組。然而,在一個較寬的激勵頻帶的發射帶通和展寬到包括低波長的光,通過所產生的圖像的Cy3過濾塊在某種程度上更明亮,反射更多的黃色光譜區發射的檢測。




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