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尼康顯微鏡藍色激發塊B-1A(長波輻射)

2018-03-29  發布者:admin 

尼康B-1A熒光激發塊組是為了最大限度地減少自體熒光和光漂白設計具有窄通帶激發範圍(20納米)。紫外激發塊組合,可見光和近紅外透射光譜曲線是在圖1的長通屏障下麵示出(發射)激發塊是能夠從具有顯著吸收在上部青綠色,黃色和紅色熒光發射信號的波長區域。類似於在此係列的其它的激發塊,所述的B-1A具有長通二色鏡具有一個切口上的505納米的波長。

藍色激發塊座B-1A產品規格:

  • 激發波長篩選: 470-490納米(帶通,480 CWL)

  • 雙色鏡截止波長: 505納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長: 520納米截止點(長通,LP)

包含在該長通發射濾光片B-1A組合傳輸速度要比任何顯著更多的信號E -係列激發塊套,其中利用帶通發射濾光片,但20納米激發帶寬是最窄的尼康顯微鏡藍色激發/長通發射濾光片收藏。其結果是,從圖像中的B-1A激發塊組合都不亮如那些與生產B-2AB-3A。在一般情況下,然而,具有長通發射濾光片的藍激發濾光片組合產生比它們的帶通(發射激發塊)對口相當亮的圖像,但通常在低得多的信號-噪聲比為代價(導致更輕的背景)。在黃色,橙色的熒光發射,和紅色區域是在使用收集的圖像經常可見B-1A激發塊組合(參見圖2)。

所述B-1A激發塊組合被設計為最大化時結合有染液采用如碘化丙啶(由藍色光(包括熒光素和Alexa Fluor 488)激發流行熒光染料的發光的PI)或四甲基羅丹明異硫氰酸酯(TRITC)。這組也正在研究以下熒光團時,建議:Acridine Orange, Acridine Yellow, Auramine O, 5-carboxyfluorescein ( 5-FAM ), Alexa Fluor 488, BODIPY FL, Calcein, Calcein Green-1, coriphosphine O, Cy2, DiO, fluorescein isothiocyanate ( FITC ), Fluo-3, FluoroJade, FluorX, FM 1-43, LysoTracker Green, MitoTracker Green, Oregon Green derivatives, oxacarbocyanine 染料 (例如 DiO ), RH 414, Rhodamine 110, Spectrum Green, SYTO, SYTOX Green, YOYO-1, and YO-PRO-1.。在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置藍色吸收熒光探針的這種激發塊組合的性能。

示於圖2(a)是從大鼠袋鼠的培養物(熒光發射強度PTK2)上皮細胞進行免疫熒光標記與初級抗牛阿爾法隨後的山羊抗小鼠β-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的Fab綴合的Alexa Fluor片段488.最大吸收的Alexa Fluor 488的是495納米,並且最大發射發生在519納米。需要注意的是在整個細胞質中延伸的細胞內微管網絡的突出染色。另外,將試樣同時染色核蛋白質CDC6(偶聯至太平洋藍),以及用於F-肌動蛋白與鬼筆環肽從紅綴合的Alexa Fluor 568注信號的存在(的Alexa Fluor 568)的熒光團,但沒有來自藍色(太平洋藍)探針,其是不能有效地激發在由該激發塊組合使用的波 長的熒光發射的。

圖2(b)說明了的性能的B-1A使用被標記SYTOX綠染色的染色質在核印度麂細胞的培養物過濾組合。最大吸收的SYTOX Green是504納米,並且最大發射發生在523納米。另外,將試樣同時標記與初級抗人氧化磷酸化複合物V抑製蛋白的小鼠單克隆隨後的山羊抗小鼠抗體的Fab偶聯於太平洋藍(最大吸收在410納米)的片段。肌動蛋白細胞骨架網絡也被標記鬼筆環肽綴合的Alexa Fluor 568注微弱信號電平的存在下從紅色(的Alexa Fluor 568)熒光團。奧林巴斯顯微鏡

小鼠腸的薄切片染色的Alexa Fluor 568鬼筆標本(絲狀肌動蛋白; 600納米排放)和SYTOX綠色(核; 504納米激發和523納米的排放)是在圖2(c)所示。注意背景噪聲相比於其他尼康長通激發塊的組合(低級別的B-2AB-3A),和顯著量的Alexa Fluor 568顯示的圖像中所產生的紅信號。圖2(d)表示的HeLa上皮細胞進行免疫熒光標記的同隨後的山羊抗小鼠初級抗OXPHOS複合V抑製蛋白的單克隆抗體(小鼠)的Fab綴合的Alexa Fluor 488的吸收最大值的Alexa Fluor 488是495的片段納米,並且最大發射發生在519納米。另外,將試樣同時染色綴合鬼筆環肽F-肌動蛋白的Alexa Fluor 568(紅色),以及用於DNA用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)。注意信號的來自紅色和綠色熒光,但由於沒有從DAPI,任何顯著發光強度是不能有效地激發的藍色波長區域的存在。

從染色的BODIPY FL phallacidin,其結合細胞內絲狀肌動蛋白網絡牛肺動脈血管內皮細胞的培養物的熒光發射強度,在圖2(e)中示出。最大吸收BODIPY FL的是503納米,並且最大發射發生在512納米。另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和MitoTracker RED CMXRos(靶向線粒體;紅色發光)。注意信號從紅色熒光團(MitoTracker)的存在,但不存在藍色熒光從DAPI,這是不能有效地激發在此光譜區域。

示於圖2(F)是由薄麥粒的部分(自體熒光的發光強度小麥)的組織。在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。在藍色區域,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與420和460納米之間的波長激發。注意頻譜滲出通過從自體熒光發射在黃色和紅色光譜區域與存在的B-1A激發塊的組合。




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