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尼康顯微鏡雙頻激發塊DAPI-FITC

2018-03-29  發布者:admin 

尼康雙激發帶通DAPI-FITC濾波器集合被設計用於同時檢測的流行的熒光團的DAPI並且當組合應用的FITC(異硫氰酸熒光素),並結合了激發濾光片具有窄帶通窗中的紫(400-418nm)和藍色(478-495nm)光譜區。 紫外線和尼康顯微鏡DAPI-FITC濾光片組合可見光透射光譜圖說明如下圖1中的雙發射(阻擋)濾波器的帶通區域,並入到單個濾光器,允許檢測來自兩個熒光染料的藍色和綠色發射同時,同時盡量減少探針之間的頻譜交叉。 透射和反射帶的每一個濾光器,以及具有兩個帶通透射區域二色性反射鏡的應用程序之間的急劇過渡(多色;選擇為互補的發射和激發波長),允許雙波段信號檢測以最小的幹擾。

雙激發濾波器模塊DAPI-FITC規格:

  • 激發波長篩選:400-418nm(帶通,409 CWL)和478-495nm(帶通,487 CWL)

  • 多色鏡波長:435-470nm(帶通)和505-570nm(帶通)

  • 屏障過濾波長:450-465nm(帶通,458 CWL)和510-555nm(帶通,533 CWL)

DAPI-FITC雙波段熒光濾波器組合被用於同時檢測所述熒光染料DAPI和FITC與頻帶之間的最小串擾的專門設計的,並且可以與其他對具有相似光譜分布的熒光探針的使用。 濾波器組的較短波長信道將選擇狹義的光譜區為紫色激發和藍色發射的檢測,而較長的波長分量對應於藍色激發綠色發光檢測。 短波長激發通帶傳輸簡檔被刻意降低,以提供與藍色激發熒光信號更好的平衡。 研究以下的熒光團的各種組合時,此濾波器組建議:DAPI,藍色熒光蛋白(BFP)或Hoechst 染料(紫色激發),配對用FITC,綠色熒光蛋白(GFP),的Cy2,或的Alexa Fluor 488(藍激發)。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置的熒光探針對這個濾波器組合的性能。

示於圖2(a)是使用DAPI-FITC濾波器塊和印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 488綴合鬼筆環肽,其結合到細胞內絲狀肌動蛋白網絡的成纖維細胞的培養的熒光發射輪廓。 的可見光最大吸收的Alexa Fluor 488的是495nm,並且最大發射發生在519nm,在光譜的綠色區域中。另外,將試樣同時用DAPI染色(靶向DNA在細胞核中;激發在358nm,並且發射在461nm)和MitoTracker紅CMXRos(靶向線粒體;紅色發光)。 注意沒有來自紅色熒光團(MitoTracker)信號,但明亮的綠色熒光的肌動蛋白絲和從DAPI細胞核的稍低強度藍色信號表現出的存在。(奧林巴斯顯微鏡)

小鼠腸沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素,藍色熒光的凝集素特定於杯狀細胞的粘液的薄膜部,是在圖2(b)中。 另外,將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白; 600nm發射)和SYTOX綠(核; 504nm激發和523nm發射)。 注意從藍色熒光團(Alexa Fluor 350),但是核中的組織標本的明亮的綠色熒光的低信號電平由於SYTOX綠熒光。 這種雙重激發濾光片組合有效地消除了紅色(的Alexa Fluor 568)探測信號。

如圖2(c)展示了從大鼠袋鼠(PTK2)上皮細胞的培養物被認為免疫熒光標記的同隨後山羊綴合的Alexa Fluor 488抗-小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發射強度。另外,將試樣標記用Hoechst 33258,其選擇性地結合到DNA中的細胞核,和MitoTracker Red CMXRos(靶向線粒體;紅色熒光)。 注意突出綠色染色,在整個細胞質延伸的細胞內微管網絡,和從Hoechst 33258的藍色發射綁定到DNA的細胞核中。 在圖像的下部的細胞中出現前中期或中期狀態下進行有絲分裂。

瑞士小鼠(3T3線)細胞免疫熒光標記的同隨後山羊綴合的Alexa Fluor 568抗-小鼠Fab片段初級抗細胞色素氧化酶的小鼠單克隆抗體,圖2(d)是示出。 將試樣也標記有幾個額外的探針,包括凝集素羅馬蝸牛凝集素(HPA)的綴合的Alexa Fluor 488(綠色發光),其選擇性地結合糖蛋白在該細胞係中的高爾基體。 細胞骨架肌動蛋白絲染色的Alexa Fluor 680(紅色激發;近紅外輻射)和核DNA標記有DAPI(藍色發光)。 注意高爾基體的突出綠色染色,並在細胞核中觀察到的藍色熒光強度。

由薄小鼠腎髒的部分沾上多個(3)的熒光團的熒光發射是在圖2(e)所示。 在組織切片細胞核靶向與核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358nm,並且具有發射最大值在461nm。 另外,低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素(腎小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。 注意信號的同時從藍色(DAPI)和綠(的Alexa Fluor 488)的探針,但由於沒有橙紅色熒光由於將Alexa Fluor 568綴合物中的肌動蛋白和刷狀緣的網絡的存在。

從玉米籽粒的自發熒光發射( 玉蜀黍 )薄膜部中演示了圖2(f)所示。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。 在紫外和藍色激發區域,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與350和500nm之間的波長激發。 對於以上所示的玉米仁組織,注意自發熒光發射強度中的藍色和綠色光譜區域的存在,這是尼康DAPI-FITC熒光濾波器組合的特性。




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