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奧林巴斯顯微鏡的表位標記

2018-03-29  發布者:admin 

表位(也稱為抗原決定簇 )是生物結構或序列,例如蛋白質或碳水化合物,它是由一種抗體作為抗原識別。 當形成在其中的氨基酸或糖線性排列的蛋白質或多糖的麵積適當的結構發生了抗原的識別。 大多數蛋白質通常有幾種表位。 抗體提供了一個重要的技術(稱為免疫測定 ),用於識別特定細胞成分(蛋白質,脂質,碳水化合物等),以跟蹤功能,分發和修改的生活和固定細胞內的感興趣的蛋白質。

所述抗體通常是通過精煉目的蛋白質並在兔或小鼠注射它獲得。 但是,這需要時間的顯著時期,也有在抗體創建失敗,很多情況下(沒有表位)。 然而,在DNA重組技術的最新進展已使人們有可能創造一個融合蛋白,其中感興趣的蛋白質結合與蛋白質(肽)的小片段工作作為表位。 具有標記的表位的蛋白質然後可以通過使用特異性抗體的表位來檢測。

奧林巴斯顯微鏡用表位標記是類似於構建綠色熒光蛋白( 兩性平等問題協調 )的重組的做法。 從目標蛋白質的基因插入到表位標簽矢量和所述目標蛋白與它的標簽是由載體的轉染細胞中表達。 該蛋白質是根據蛋白質的原始屬性在細胞內分布。 當使用兩性平等問題協調,靶蛋白可以容易地觀察到,因為GFP標簽發出熒光; 然而,使用表位標記時,靶蛋白可以僅通過免疫學方法,因為表位標簽是不起作用的細胞中檢測到。奧林巴斯顯微鏡

表位標記的優點

  • 重組方法提供了一個非常短的時間內要求相比普通抗體製劑,這需要超過一個月免疫實驗動物。

  • 使用單一的表位標簽,在檢體的各種蛋白質可通過相同的標記特異性抗體來檢測。

  • 重組標簽能夠以較低的成本比抗體製劑來完成。

  • 表位標簽是由3至14個氨基酸,並且不破壞正常的蛋白質的功能。

  • 表位標記可以使用兩種蛋白質具有相似的抗原之間進行區分。

  • 該技術可以用於檢測蛋白質,是非常困難的分離和純化。

下表顯示了通常用作表位標簽的氨基酸安排:

常見的表位標簽
名字氨基酸含量氨基酸序列
HA9YPYDVPDYA
FLAG8DYKDDDDK
C-MYC10EQKLISEEDL
表1

發現

直接和間接的方法可以用於像熒光抗體技術。 與直接的方法,所述抗體為標記標記有熒光染料,同時用間接法,針對該標記的抗體作為初級抗體被施加並在該標記有熒光染料的二抗進行檢測。

有關表位標記的更多信息,請參考羅氏網站上的實驗手冊。

單字母氨基酸代碼
A - AlanineC - CysteineD - AspartateE - Glutamine
F - PhenylalanineG - GlycineH - HistidineI - Isoleucine
K - LysineL - LeucineM - MethionineN - Asparagine
P - ProlineQ - GlutamineR - ArginineS - Serine
T - ThreonineV - ValineW - TryptophanY - Tyrosine
表2




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