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尼康顯微鏡綠色激發塊Cy3 HYQ(帶通)

2018-03-29  發布者:admin 

都為尼康Cy3的紫外線,可見光和近紅外透射光譜曲線(高性能設置與尼康HYQ指定)濾波器組合下麵示於圖1.該濾波器組是兩個在Nikon綠色激發係列1那采用的帶通發射(阻擋)濾波器而不是一個長通型,並且按照設計,有效地限製了從熒光團發射外目標的光譜的波長範圍的幹擾。 如同在HYQ係列的其它的過濾器,切割上和截止轉換在Cy3 HYQ濾波器的斜率很陡(隻有幾個大小納米),以幫助減少排放交叉,並通過頻帶為擴大收集更多的信號。

綠色激發濾波器模塊的Cy3(HYQ)規格:

  • 激發波長篩選:530-560納米(帶通,545 CWL)

  • 雙色鏡截止波長:570納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長:573-648納米(帶通,610 CWL)

所述的Cy3熒光濾波器組合(如以上所討論,尼康HYQ高性能幹涉濾光器係列中的一員)是在結構上的標準的帶通發射綠色激發組(G-2E / C)的相似,但具有更寬的帶通的窗口的激發和發射(屏障)的過濾器。 這些高性能的過濾器被製造具有更大數目同時在激發和發射濾光片幹涉腔,允許頻譜輪廓之間的更接近而不遭受過度的串音。 該二色鏡截止波長是570納米,並且是結合了介質30納米激發通帶(530-560納米)連同一個非常廣泛的75納米的發射通帶(573-648納米)。 該組能夠有選擇性的激勵和檢測在多個標記實驗中使用的具體流行熒光團,並且通常適用於廣泛範圍的由綠色的波長激發探針。

所述的Cy3 HYQ濾波器組合,推薦用於與花青熒光探針的Cy3使用,並且被設計成減少或消除從熒光團發射的紅光和近紅外幹擾時的探針,如四甲異硫氰酸酯(TRITC)和DII中的多個標記中使用技術。 所述的Cy3 HYQ濾波器集合可以用基本相同的熒光染料為G-2E / C組合被利用,並產生,相比之下,由於增加的激發和發射能量稍微明亮的圖像所允許的更寬的帶通的窗口。 此外,發射帶通到較低的波長的延伸,相對於G-2E / C組,產生具有色調圖像移向橙色和黃色。 Cy3的,Cy3.1.8,吖啶紅,將Alexa Fluor 546,的Alexa Fluor 555,茜素紅,BODIPY探頭,鈣橙,DiI標記,DiIC16,DiIC18,溴化乙錠,NeuroTrace 530 /:學習以下的熒光基團,當Cy3的HYQ集推薦615,碘化丙啶,派洛寧B,RedoxSensor紅CC-1,羅丹明衍生物,塞夫龍河豔紅和TRITC。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置吸收綠光的熒光探針的這種過濾器組合的性能。

如圖2(a)是沾上MitoTracker紅CMXRos,它的目標細胞內的線粒體的網絡牛肺動脈內皮細胞培養的熒光發射強度。 最大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米,並且最大發射發生在599納米。 另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和BODIPY FL-phallacidin(靶向肌動蛋白;綠色發光)。 注意沒有信號從藍色(DAPI)和綠(BODIPY)熒光團,但明亮的橙黃色熒光由管狀線粒體發揮。

印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 568綴合鬼筆環肽,其結合到細胞內絲狀肌動蛋白網絡的成纖維細胞的培養,是在圖2(b)中。 最大吸收的Alexa Fluor 568的是578納米,並且最大發射發生在603納米光譜的橙色區域。 另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和MitoTracker綠FM(靶向線粒體;綠色發光)。 注意沒有信號從綠色(MitoTracker)和藍色(DAPI)的熒光團,它們是不能有效地激發在綠色波長,但明亮的橙紅色熒光的肌動蛋白絲發揮。(奧林巴斯顯微鏡)

由薄小鼠腸的部分沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素,藍色熒光的凝集素特定於杯狀細胞的粘液中演示了圖2的(c)的熒光發射強度。 另外,將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白; 600納米發射)和SYTOX綠(核; 504納米激發和523納米發射)。 注意背景噪聲相比於其他尼康長通濾波器的組合(G-2AG-2B),並在顯著量的Alexa Fluor 568顯示的圖像中所產生的黃-紅信號的低電平。

示於圖2(d)是HeLa細胞免疫熒光標記的同隨後綴合的Alexa Fluor 546的吸收最大值的Alexa Fluor 546山羊抗-小鼠Fab片段初級抗組蛋白(鍋)鼠單克隆抗體的556納米,並且發射最大值出現在573毫微米(在可見光光譜的黃色區域)。 第一抗體,從HeLa細胞的純化核級分生產,特異性結合的抗原決定簇,其存在於所有五個組蛋白(H1,H2A,H2B,H3和H4)。 請注意,從發生有絲分裂的細胞中強橙黃色熒光強度,但間期核的降低排放強度。

在圖2(e)在對女兒鼠袋鼠(PTK2)上皮細胞,示出,分別是那些在被免疫熒光標記的同隨後綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的培養到的Alexa Fluor 546的吸收最大值的Alexa Fluor 546的是556納米,並且最大發射發生在573納米(在可見光光譜的黃色區域)。 需要注意的是在整個細胞質中延伸的細胞內微管網絡的突出黃橙色染色。

自體熒光發射強度從鬆( 火炬鬆 )花粉粒是表現在圖2(F)。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。 在藍紫色區域中,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與400和440納米之間的波長激發。注意自發熒光發射強度中的橙色和紅色光譜區域的存在,這是強烈讓人想起暗視場圖像的。



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