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尼康顯微鏡紫外激發快藍色熒光蛋白(帶通)

2018-03-29  發布者:admin 

紫外線和用於高性能尼康藍色熒光蛋白可見光透射光譜圖(BFP)濾波器的組合在圖1,本濾波器組由使用帶通發射濾波器,其不同於紫羅蘭組中的另外兩個50納米以下所示通帶(435-485納米)限製檢測到的那些發射在藍光光譜區域的熒光染料。 此外,窄22納米的激發帶通(延伸至僅401納米)最大程度地減少自體熒光,並且被耦合以較低的二色鏡截止波長(420納米)相比被用在其它紫色過濾器集。 雖然主要設計用於熒光蛋白的成像,此帶通發射組合是用於獲得具有多個標簽標本圖像時熒光團中的一個是有效地激發在紫色光譜區域是有用的。

紫激發濾光片座BFP規格:

  • 激發波長篩選:379-401納米(帶通,390 CWL)

  • 雙色鏡截止波長:420納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長:435-485納米(帶通,460 CWL)

BFP濾波器塊被設計為最佳性能與藍色熒光蛋白,並通過利用帶通發射濾波器,紅色和綠色熒光的在乘法 - 標記的試樣在黑色背景上排除的檢測,產生的圖像具有豐富的和深藍色的顏色。 窄帶寬激發濾光片旨在減少或消除內源性煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的激發在紫外線和紫色波長的光。 學習下麵的熒光團時,BFP過濾器組合推薦:藍色熒光蛋白,增強藍色熒光蛋白,超發光藍色熒光蛋白,瀑布藍,兒茶酚胺,熒光胺,羥基香豆素,Leucophor SF,太平洋藍,以及TNS。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置紫羅蘭吸收熒光探針的這種過濾器組合的性能。

示於圖2(a)和2(e)是從印 度麂的培養鹿皮成纖維細胞進行了免疫熒光標記與任一主抗牛的α-微管蛋白的發光強度(圖2(a))或抗OXPHOS複合V抑製劑蛋白(圖2(e))的隨後偶聯於太平洋藍山羊抗-小鼠Fab片段的小鼠單克隆抗體。 最大吸收太平洋藍的是410納米,並且最大發射發生在455納米。 注意細胞內微管的突出染色(圖2(a))和線粒體(圖2(e))的網絡上延伸遍及在這些標本的細胞質中。(奧林巴斯顯微鏡)

圖2(b)表示由薄小鼠腎髒的部分用DAPI染色,將Alexa Fluor 488麥胚凝集素,綠色熒光的凝集素是特定於腎小球和曲小管的熒光發射強度。 最大吸收的DAPI的是358納米,並且發射最大值是461納米。 另外,檢體被同時染色的Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白)。注意沒有光譜滲出通過從紅色和綠色的熒光團。 圖2(D)呈現具有用DAPI染色的細胞核牛肺動脈培養細胞。 盡管DAPI的熒光團通常是用紫外線激發濾光片組合使用,許多紫色過濾器集能產生極好的影像。

從大鼠袋鼠腎上皮細胞(PTK2線)的培養深藍色熒光發射強度是在圖2的(c)。 將培養物免疫熒光標記與初級抗細胞角蛋白(一種中間絲蛋白),隨後偶聯至碼頭藍山羊抗-小鼠Fab片段的小鼠單克隆抗體。 最大吸收碼頭藍的是365納米,並且最大發射發生在460納米。 另外,將試樣同時染色線粒體與MitoTracker紅CMXRos。 注意沒有信號從紅色熒光團與該帶通發射濾波器的組合。

自身熒光在植物組織(玉米粒組織部分)在圖2(f)中表示的,並表明內源性熒光團在這些標本的深藍色發光光譜。 注意,與BFP濾波器組合表現出少得多的背景熒光比所述長通發射(Ⅴ-1AV-2A)紫色激發過濾器集的拍攝圖像。




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