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貨真價實 坦誠無欺
新聞資訊

尼康顯微鏡試樣製備及成像

2018-03-29  發布者:admin 

程序,在共聚焦顯微鏡製備和成像標本主要來自那些已經發展了許多年,與傳統的寬視場顯微鏡使用這一點。 在製定的檢體的新協議的最佳方法用共聚焦顯微鏡成像是開始與一個已知的適合於傳統的顯微鏡,並根據需要對其進行修改。

不管所采用的樣品製備協議,在其中共聚焦顯微鏡下進行的方式的主要優點是在圖像顯示和分析導致從同時采集多個圖像,以數字形式,到計算機的靈活性。 這在下麵更詳細討論的,但在圖像顯示可能性之一優雅的例子是在圖1中,一個三重標記果蠅胚胎在細胞胚階段。 將試樣免疫熒光標記的抗體,以三種不同的蛋白質。 之後被收集在共聚焦係統中的紅,綠和藍色通道3相應的圖像時,圖像可以通過將它們複製到不同的信道被重新安排。 通過評估從合並3所得的圖像時,最有效的顏色到的信道分配用於說明各種蛋白質結構域被選擇。 圖1表示在合並三通道圖像(組合紅,綠,藍信道)。

大部分,在製備試樣的常規寬視場光學顯微鏡已證明是成功的方法是專門旨在降低的離焦的熒光的量,因為這將產生眩光的圖像,極大地減少了所感興趣的特征的分辨率在。 由於由共聚焦方法所取得的光學切片,相比於常規落射熒光顯微鏡的共聚焦顯微鏡采樣不足在一個厚的樣品的熒光。 其結果是,樣品可能需要進行共聚焦分析增加染色倍或汙點的濃度,並且如果評價在常規的顯微鏡,可能表現為過度染色。

雖然在典型的激光掃描共聚焦係統中的照明似乎是極亮,在試樣上的任何給定的點的平均照度相對溫和,由於這樣的事實,許多點每秒掃描。 以每1.6微秒一個點一個典型的掃描速度,在任何給定點實際照度通常比傳統寬視場落射熒光顯微鏡更少。 它通常建議使用最低的激光功率即實用成像,以保護該熒光團。 雖然許多協議包括反漂白劑,以防止熒光物種的衰落,這種添加劑可以不需要與許多更現代的共聚焦儀器。

共聚焦顯微鏡的主要優點和應用是更厚的標本改進的成像能力,盡管成功可以通過檢體的特定性能的限製。 為標本某些最低的物理要求適用; 它必須適應在顯微鏡的階段,和感興趣的區域必須能夠被放置在物鏡的工作距離範圍內。 在某些情況下,分辨率可以具有以容納試樣,並且避免損壞它或物鏡受到損害。 例如,高分辨率透鏡,例如具有60倍的1.4的數值孔徑可以具有170微米的工作距離,而一個20×(具有0.75的典型數值孔徑)可以提供一個相對較大的660微米的工作距離,以能夠訪問一個樣本更受限製的地區沒有物理幹擾。

試樣具有三維結構,它是待研究的共聚焦顯微鏡,必須被安裝在這樣一種方式,以保持結構。某種間隔物,如漁線或一塊蓋玻片的,通常被放置在載玻片和蓋玻片,以避免變形試樣之間。當活樣品進行研究時,通常需要將它們安裝在一室中,提供所有的生命必需的要求,並且也將允許通過物鏡到圖像所需的區域足夠的訪問。

物鏡的鏡頭參數和光學部分厚度

物鏡

針孔

放大倍數

數值孔徑NA

關閉 (1 mm)

開放 (7 mm)

60x

1.40

0.4

1.9

40x

1.30

0.6

3.3

40x

0.55

1.4

4.3

25x

0.80

1.4

7.8

4x

0.20

20.0

100.0

表1

檢體性質影響光傳輸,如不透明度和濁度,可以在激光束的穿透深度大大影響到檢體,因此,可以被成像的結構。 眼睛的未定影和未染色的角膜上皮,例如,相對透明和激光束將它穿透到大約200微米的深度。 與此相反,未定影的皮膚是相對不透明並散射更多的光,這限製了激光穿透至約10微米。 許多固定的協議包括某種形式的清除劑的目的是增加所述組織的透明度。

如果有足夠的激光穿透不能與一個整裝樣品來實現,厚的部分可以用切片機進行切割。 固定的組織通常用於切片,但組織(如活腦)已減少的振動切片機並成功成像。 要訪問一個部分的較深部分安裝,所以能夠從載玻片取出試樣,倒轉,並重新裝入它,但是這通常不是很成功。從樣本的稍微更深部位圖象可以通過使用被激發在較長的波長(例如花青5),相對於那些需要更短的波長激發的染料來獲得。 使用較長波長的照明會,然而,稍減少,可以相比於在較短的波長獲得的圖像來實現的最大分辨率。 出於類似的原因,多光子成像技術允許圖像被從樣本內更深層次(由於使用的紅色光為激發)搜集。

物鏡

對於共聚焦顯微鏡的研究,所用的物鏡的選擇是極其重要的,因為該透鏡的聚光能力,測定其數值孔徑,是既分辨率和光學部厚度的一個決定因素。 保持其他顯微鏡變量不變,較高的物鏡的數值孔徑是,較薄的光學部分會。 作為例子,將一個特定的儀器,使用的是60倍(1.4數值孔徑)的光學切片厚度與針孔直徑設定以1mm目的是約0.4微米,並與透鏡16倍(0.5的數值孔徑),具有相同的1-毫米針孔,切片厚度為1.8毫米的量級上。 通過打開針孔到較大的直徑,該光學部的厚度可以增加。 表1給出了光學部的厚度值(以微米)關於各種物鏡在兩個不同的針孔直徑對於LSCM之一模型。 圖像分辨率總是較差垂直比它水平。 例如,使用60倍,1.4的數值孔徑,物鏡的水平分辨率是約0.2微米,垂直分辨率為約0.5微米。 場和色差的平整度時,選擇的物鏡要考慮附加透鏡的特性。 成像多標記標本在不同波長時的色差校正的程度是特別重要的。

物鏡,其能夠最高分辨率的通常是那些具有最高放大率和最高的數值孔徑。 它們也是最昂貴的,因此折衷經常被掃描試樣的麵積,並且可以實現對於該區域的最大分辨率之間進行比較。如果成像昆蟲胚胎和成蟲磁盤,例如,一個4倍透鏡可能被用於定位試樣上滑動,鏡頭16倍(0.5數值孔徑)進行成像全胚胎和40倍(1.2數值孔徑)或60倍解決胚胎或成蟲盤內的個別細胞核鏡頭(數值1.4光圈)。 成像較大的組織,如蝴蝶成蟲盤,4倍帶透鏡將是整個翼磁盤是有用的,並且在40倍或60倍於單個細胞的分辨率。 圖2(a)示出使用了4倍物鏡以獲得整個蝴蝶五齡翼成蟲盤的整體圖,並且通過一個16倍透鏡提供的額外核細節(圖2(b))。 其中高分辨率和大視場的圖像可被組合的一種方法是獲得許多圖像從相鄰的區域,並將它們進行數字組合成的蒙太奇。 一些顯微鏡已經自動化,可以設置走動試樣和收集多個圖像轉換成的大麵積的蒙太奇XY階段。

一個更實用的功能,是最LSCMs的特性是放大的圖像的能力,使用相同的物鏡,在不損失分辨率。 這種能力是通過減少由激光掃描檢體的區域中,通過的掃描鏡控製簡單地實現,同時保持相同的圖像的顯示尺寸或存儲器存儲陣列的大小,有效地增加了放大率。 這樣,多個放大倍數而不幹擾樣品或在視場失去軌道的參考點與單個透鏡來實現的。 隻要有可能,但是,更高的數值孔徑的透鏡,應使用以最大化分辨率,而不是使用較低數值孔徑的透鏡變焦。用一個單一的透鏡(40倍)放大的能力表示在圖2(CF)。 數字麵板(c)所示的40倍的物鏡(相對於16倍視圖麵板(b))提供的額外核的細節。 到(f)板(d)是通過累進的,通過減少掃描在試樣上的區域來完成變焦相同40X透鏡獲得的圖像。

若幹共聚焦儀器設計的具有可調節的針孔限製離焦的光到達檢測器。 打開針孔到較大直徑產生較厚的光學部分和減小的分辨率,但往往是必要的,以包括更多的樣品細節或增加撞擊檢測器的光。 如針孔被關閉(直徑減小)所述光學部的厚度及亮度下降。 分辨率增加,直到一定的最小的針孔直徑達到,超過此分辨率不增加,但亮度繼續降低。 針孔直徑在其達到該條件是每個物鏡不同。

探針共聚焦成像

共聚焦儀器的發展繼續既影響,並通過改善免疫熒光定位新的熒光探針的合成的影響。 熒光染料被引入具有激發和發射光譜更緊密地匹配由與大多數商業LSCMs供給的激光器產生的波長。 改進的探針可以綴合到目前的研究興趣的抗體正在不斷的發展。 作為一個例子染料組,花青已經發展成為替代其他曆史悠久的染料,用花青3,以羅丹明一個光明的選擇,花青5的發現越來越多地使用三聯標簽策略。

熒光原位雜交(FISH),具有在分辨率和探針檢測的靈敏度加上的LSCM時被進一步提高的優點,並且是用於成像熒光標記的DNA和RNA序列在細胞中的分布的有價值的方法。 此外,更亮的熒光探針是目前可用於在兩個細胞核和分離的染色體總DNA的LSCM成像。

是可用的,當在相對簡單的協議並入,特別是染色的某些細胞器和結構的大量的熒光探針。間可用探針的過多是染料標記的核,高爾基體,內質網,線粒體和,並且還染料物鏡聚合肌動蛋白的細胞中,如鬼筆環肽熒光標記。 這樣的染料是在多個標簽的方法非常有用以定位具有在細胞中的特定隔室的興趣抗原。 例如,圖3呈現的鬼筆環肽和核染料(TOPRO)與施加到蝶蛹翼成蟲盤整體裝有一三重標記方案的適當的抗原相結合的工作。 如圖3的(a),鬼筆環肽可用於強調細胞概述在開發組織中,與周邊的肌動蛋白小梁被標記為明亮的熒光環。 該圖的圖(b)示出了在標記隻是一個蜂窩部件的核染料的戲劇性特異性。 除了這種蜂窩室的標記策略,抗體在細胞(如抗微管蛋白)已知分布或功能的蛋白可有效地包含在多標記研究。

如果活細胞都被成像時,要注意的添加熒光染料對係統的影響是至關重要的。 這些探頭可以是有毒的活細胞,尤其是當他們興奮的激光。 有毒的影響是通過加入抗壞血酸到細胞培養基中減少一些準備協議。 該標記的特定細胞成分可以在成像期間會影響細胞的活力。 例如,汙漬的細胞核往往具有比細胞質汙漬更有害作用。 探針是可用的活細胞和死細胞區分(其中這些是吖啶橙),並且可以在成像期間被用於在細胞活力測定。 大多數此類測定法是基於的前提是,死細胞的膜是可滲透的許多材料,如染料,不能穿透它們在活的狀態。

的Fluo-3和RHOD-2是已合成以改變在某些離子如鈣的存在下其熒光特性的染料的例子。 新的探針已經開發了用於成像的基因表達,包括例如,水母綠色熒光蛋白(GFP),使基因表達和蛋白定位在體內進行觀察。 利用綠色熒光蛋白,使基因表達的監測在許多不同的細胞類型,包括活果蠅卵母細胞,哺乳動物細胞,以及植物(使用LSCM的激發激光的488nm處線)。可用於在多重標記實驗使用的GFP與光譜變化的突變體,並且這些人還發現使用用於避免幹擾自體熒光的活組織。

自體熒光

組織自發熒光天然存在於許多類型的細胞,並且可以是對背景幹擾成像過程中的一個主要來源。 例如,葉綠素在酵母和植物細胞熒光在光譜的紅色部分。 某些試劑,例如戊二醛固定劑,是自體熒光的來源,這可以通過處理來減少與氫硼化。 自發熒光有時可以避免使用可在波長超出天然的自體熒光的範圍內被激發的熒光團。 花青5通常選擇,因為它是在激發波長較長,避免了短波長的自體熒光。

雖然它是最經常考慮的一個問題,組織自發熒光可以用於成像整體細胞形態為多重標記研究的一部分。 從自體熒光的總熒光的貢獻可以通過查看未染色標本在不同波長,並指出,激光功率和黑電平及增益的PMT設置進行評估。 自發熒光通常可以漂白通過短暫暴露於激光在高功率,或通過從水銀燈充斥標本的光。 更複雜的方法來處理自體熒光包括使用時間分辨成像,或者使用諸如圖像減法數字圖像處理技術去除。

收集圖片

共聚焦顯微鏡的初級用戶能夠獲得在幾個方麵的經驗。 由製造商提供的顯微鏡手冊通常包括一係列必要的入門簡單的程序。 在大多數多用戶設備,主要負責人的操作儀器可以提供情況介紹會,或設施經理可能需要一定的專業水平很短的訓練和示範獨奏使用該儀器被允許之前。應特別注意支付給工廠的家規。 信息和培訓,也可以從顯微鏡進行企業培訓課程得到,從研討會顯微鏡,並從各種出版物。

之前的工作與實驗標本進行,它是必不可少的,以熟悉的攝像係統的基本操作。 它通常是有益的新手開始試成像一個相對容易的標本,而不是一個更困難的實驗之一。 一些更好的測試樣品包括紙浸泡在一種或多種熒光染料或製劑的熒光珠。 這兩種類型的試件是明亮的熒光,並相對容易的圖像與一個共聚焦係統。 另一個出色的樣品混合花粉,表現出許多不同波長的自發熒光的載玻片。 這些都可以從花粉從園林植物收集容易地製備,或可以由生物標本的商業供應商獲得。 圖4中的花粉粒圖像同時收集具有相同的PMT中的黑電平與增益和針孔直徑設置,但揭示了三種類型的花粉,每個熒光在不同的激發波長。 這些樣品是作為測試對象有價值的,因為它們不僅有一些有趣的表麵細節,但也保持它們的特性相對較好,當暴露於激光束。 對於活組織試驗,標本洋蔥上皮或自來水廠伊樂藻準備。 是可靠的,無論是使用自體熒光或染色DiOC6。

在嚐試成像,共聚焦儀器應設置以獲得最佳的性能。 這需要最佳比對,特別是當正在使用的舊的共聚焦顯微鏡中的一個。 使用的對齊程序是非常具體到特定儀器,通常最好誰擁有維護它總負責人完成的。 在任何情況下,應調整嚐試,而不從顯微鏡的所有者適當的培訓和權限。程序不當用於嚐試調整可能會導致在梁完全喪失,可以在某些儀器的情況下,需要服務的訪問整頓。

共聚焦係統是基於傳統的光學儀器和光學顯微鏡的基本程序和做法應遵循在任何時候。 所有玻璃表麵的光路是幹淨的,因為灰塵,油或載玻片上,蓋玻片和物鏡潤滑脂差圖像的一個主要原因,是極其重要的。 物鏡和試樣之間的折射率必須適合於所使用的透鏡。 例如,正確的浸油必須用於一個給定的物鏡的數值孔徑,以及檢體必須被安裝成可在透鏡的工作距離範圍內。蓋玻片厚度必須正確的鏡片使用,特別是對於較高功率的物鏡,這需要1號或第1.5蓋玻片代替2號蓋玻片必須密封,用適當的介質中的滑動,以及安裝持平。 指甲油可用於固定標本如果小心以確保它是幹燥前成像。 凡士林,蜂蠟,和羊毛脂,或一些其它無毒密封材料的混合物,必須使用與活標本。 以下嚴格基本清潔度程序在試樣準備階段可以節省大量時間和努力之後。

在準備共聚焦成像模式,感興趣區域位於要麽使用明或常規熒光顯微鏡。 優選做使用共聚焦係統的顯微鏡本調查中,但它可以是非常困難的新手找到單獨使用共聚焦成像模式下的正確焦平麵。 如果傳統的成像模式不可用共聚焦係統上,那麽感興趣的結構,可以使用單獨的熒光顯微鏡的位置,並且使用在顯微鏡,記號筆菱形標記標明其位置,或者通過記錄位置從顯微鏡坐標階段。 它是特別有用的,以便能夠在嚐試圖像時罕見的現象來預覽標本共聚焦係統的實際顯微鏡如表達處於發展中含有可能數百個不同年齡的胚胎的檢體的特定階段的基因。 大量的時間可以被保存在通過這種方式,在具有掃描使用共聚焦模式許多標本。 共聚焦器械通常具有低分辨率快速掃描模式,使初步掃描更有效。 搜尋在很少發生的事件時,最好的方法,但是,是用傳統的顯微鏡模式來掃描載玻片,然後立即切換到共聚焦模式在相同的顯微鏡,收集的圖像。

成功的共聚焦成像依賴於掌握物鏡的數值孔徑,針孔大小和圖像的亮度之間的相互作用,並且使用最低的激光功率能夠實現最佳的圖像的“秘密”。 新手用戶應該嚐試使用試驗片和不同的放大倍率及數值孔徑的多個物鏡企圖對實驗標本攝像之前獲得的顯微鏡的能力的意義上改變這些參數。 比較應用共聚焦係統具有較高的數值孔徑獲得的那些使用物鏡的變焦功能獲取的圖像。 特定樣品和特征被成像將確定哪個鏡片和方法是最合適的。 適合於共聚焦顯微鏡的多物鏡的兩個例子示於圖5中的數據包括一個60倍平場複消色差物鏡油浸鏡頭,和一個20倍平場螢石。後者的物鏡有一個調整軸環,允許它與油,甘油,或水被用作浸沒介質。

適當的檢體的特定顯微鏡的設置應設置遠離感興趣的主要區域,以避免在熒光物質中的檢體的有價值區域的光漂白。 通常這需要設置在光電倍增管檢測器的增益和黑電平一起針孔尺寸,以獲得可接受的分辨率和足夠的對比度之間的最佳平衡,使用最低的激光功率可以最小化光漂白。 許多儀器利用設計中設置正確的動態範圍的圖像,以幫助顏色查找表。 這樣的表被設計成使最暗像素,在零附近具有亮度值,被任意地顯示為綠色(例如),和最亮的像素,鄰近255中的8位係統的亮度值,顯示為紅色。 顯微鏡參數,例如增益和黑電平及針孔的直徑,被調整,使得隻有幾個綠色和紅色的像素的圖像中,以確保全動態範圍從0到255被利用,但是幾乎沒有截止時亮度範圍的任一端。 雖然這些調整可以通過眼製成,在成像係統的動態範圍的極端的使用偽使得調整更主觀的。 在某些情況下,圖像必須被收集在低於該係統的全部動態範圍,因為小於最佳激光功率,必須使用或檢體有不均勻的熒光,導致亮區域掩蓋調光區域即在幀的興趣。

在掃描過程中的檢體的圖像平均化例程通常用來減少從檢測係統中的隨機噪聲並增強常數(非隨機)的特征在圖像中。 圖像均衡算法可以采集圖像之後被應用於它們擴展到顯示器的整個動態範圍。 應小心不要施加這種類型的常規的,如果是向進行,除非一個控製圖像被包含在相同的幀作為實驗圖像均衡例程之前被施加熒光強度的測量。 在使用任何類型的圖像處理程序,這是一個很好的策略,以節省原材料未處理圖像之外的任何處理的。

在圖像采集通常的策略是保存圖像到共聚焦係統的計算機的硬盤上,以後將它們備份到其他大容量存儲設備。 一般情況下,始終是最好收集盡可能多的影像盡可能顯微鏡會話期間,並在以後查看舍棄不必要的。 許多圖像,似乎沒有必要為第一考慮成為非常有價值的,在經過進一步審查(尤其是一個人的同齡人)晚些時候。 如果它似乎浪費采取看似多餘的圖像,認為它更難製備另一樣品,並且更難重現實驗的確切條件,或甚至精確複製試樣製備協議。

成像開始之前的策略在一個信息的方式標注圖像文件應該得到發展。 在成像許多音符應采取或添加到圖像文件連同該圖像如果這種能力是可用的用於在係統上。 測試應該做的,以確保任何保存的信息是保存圖像,同時要注意文本和相關的圖像等信息時,它隨後被轉移到諸如NIH圖像或Adobe Photoshop在其他圖像編輯程序,可能會丟失後訪問計算機。 一個組織良好的筆記本或膝上型計算機文件可能是優選的過記錄成像會議細節等手段,並應包括文件名,注釋和物鏡的詳細信息和用於允許計算比例尺在稍後的日期任何縮放因子。 大多數共聚焦係統並不自動記錄中使用的物鏡,並且該信息是用於計算場寬度和比例尺購買出版物重要。 許多現代係統利用該組織的文件名和文件位置的圖像數據庫,並且,通常將顯示的圖像的縮略圖文件。 必須小心遵循由係統所施加的圖像命名限製,諸如在文件名允許的字符的數目和是否字符,如時間或空間可能被軟件被曲解。

故障排除

在任何實驗學科,已產生良好效果的協議有時會莫名其妙地停止工作。 當這種情況發生時共聚焦成像實驗,有可能是一個初始反射責怪工具,而不是標本,但測試應該進行,以確認該標本是沒有過錯的任何故障排除是開始在儀器前。 一個很好的第一次測試是查看在常規落射熒光顯微鏡的樣品。 如果某些熒光是由眼可見,信號應該是非常光明的正常運轉的共聚焦係統。 經證實,熒光存在於樣品,然後應使用已知的測試樣品而非實驗之一來完成的共聚焦係統的一些試驗。 為了參考的目的,共聚焦係統應具有試樣用戶可獲得的顯微鏡,包括其收集的所有參數,例如激光功率,針孔的直徑,物鏡和變焦值,增益和圖像的數字文件黑電平檢測器的。

如果最初的測試不提供明確的解決方案,最好是尋求誰可能之前都經曆過這個問題的專家的幫助。 作為一項規則,如果用戶不知道的東西,它是最好的,他們退後一步,嚐試任何補救措施之前尋求幫助。 所有供應共聚焦顯微鏡的公司有熱線電話和網站,可以獲取更多幫助來訪問。

被追蹤到的製備協議問題通常由試劑的降解引起的,這應該通過執行一係列的診斷測試來檢查。 它通常是可取的做實驗的人,以彌補他們自己的試劑,或至少從可信同事獲得它們。 抗體應該從冷凍的儲存在小批量進行分配,然後在冷藏下保存,並且不應該被重複使用,除非絕對必要的。 有時,這是不可避免的稀有或昂貴的試劑,而且往往不存在的一個問題。

在與多標記標本的實驗中,滲出通過從一個信道到另一個可發生作為檢體自身的特性的結果,或者由於出現問題的顯微鏡。 發表評論文獻應征詢的出血,經過和可能的補救措施的原因的詳細信息。 儀器本身的一個很好的測試涉及測試樣品與已知的滲出通過屬性的成像,同時使用多標簽和單標簽設置。 試樣的圖像應與所有相關的顯微鏡設置的記錄被存儲沿,以便當確實發生的問題的試驗片可以重新成像的相同的儀器條件和圖像相比與存儲的當儀器被稱為記錄要優化運行。

出現問題時,可進行其他測試包括激光照明的顏色的視覺檢查和激光的陽極電壓的檢查。 如果,例如,一個多標簽設置在掃描時從氪/氬激光光束出現的白藍代替那麽這可能表明該紅線較弱。 在這種情況下,陽極電壓可能會過高,並且通常可以通過調整激光的反射鏡被減少到可接受的水平。 這種調整應做通過,或通過,負責維護的共聚焦係統的人員的監督。 如果電壓不能被帶進可接受的範圍內時,可能需要替換為激光。奧林巴斯顯微鏡

可能遇到的另一個問題是,抗體探針可能具有劣化或需要進行再純化或以其它方式清潔。 已經製備了一段時間的標本可能發展增加背景熒光和滲出通過引起從二次抗體分離並擴散到周圍組織的熒光。如果可能的話,成像應進行對新製備的試樣。有時改變濃度和/或熒光染料的分布將有助於緩解問題。作為一個例子,熒光素可能出血進入羅丹明信道,並且可以被切換,使得羅丹明是強信道上。這樣做的理由是,該熒光激發光譜具有一個尾部重疊帶而被激發的羅丹明波長範圍。在隨後的實驗中,次級的濃度可以降低。

圖像處理和公布

用共聚焦顯微鏡獲得的圖像通常被保存為一個格式,允許他們使用提供作為共聚焦係統的一部分的專用軟件很容易地操縱計算機數字文件。對當前的LSCMs最顯著改善性能的共聚焦圖像的顯示。這是非常重要的,因為使用的共聚焦顯微鏡中的成像的改進的小值,如果沒有辦法有效地顯示圖像或再現它們作為硬拷貝。

就在最近的5年左右前,大多數實驗室仍使用傳統攝影暗房和膠片和紙張的化學處理圖像的最終硬拷貝。有再現彩色圖像特別的困難,因為他們通常由獨立的打印機,誰往往有什麽構成的顯微正確的色彩平衡和質量打印的成本是很高的小主意打印。為了獲得圖像的硬拷貝現在,圖像文件可以導出到載玻片打印機,彩色激光打印機,或染料熱升華打印機出版質量的打印,可直接控製圖像特征由誰收購人維持圖像。的照片打印或載玻片可以直接從視頻監視器屏幕進行拍攝,並且電影序列可以在網絡上公布。

大部分期刊現在能夠接受的數字圖像文件的出版物,這導致了在公開的圖像的質量的顯著改善。通過共聚焦成像係統實現了圖像質量,現在可以更加真實地再現發表的文章。在某些情況下,雜誌也使可在CD-ROM,這意味著讀者可以訪問發布的圖像,正是因為他們出現時,這些做研究的共聚焦係統收集他們的文章。不令人驚訝地在圖像采集,顯示,和公布的技術進步是在彩色圖像中該雜誌現在可以準確地再現圖像與它們的原始分辨率和顏色平衡的情況下尤其有利,從理論上說,在低得多的成本給作者。




滬公網安備 31011202003519號