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尼康顯微鏡綠色激發塊G-2E/C(帶通)

2018-03-29  發布者:admin 

紫外,可見和近紅外透射為尼康的G-2E / C過濾組合光譜圖在圖1的下方示出該濾波器組是兩個在Nikon綠色激發係列,它采用一個帶通發射(阻擋)濾波器1代替長通版本,並且旨在限製從熒光團發射的量,組合優化的頻帶之外的幹擾。 60納米的發射窗口(590-650納米)是結合了介質25納米激發通帶(528-553納米),以允許有選擇性的激勵和檢測在多個標記實驗中使用的具體流行熒光團。對G-2E / C過濾組合配有一個565納米(截止波長)長通二色鏡。

綠色激發濾塊G-2E / C規格:

  • 激發波長篩選:528-553納米(帶通,540 CWL)

  • 雙色鏡截止波長:565納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長:590-650納米(帶通,620 CWL)

G-2E / C濾波器組合與流行的熒光探針,如四甲異硫氰酸酯(TRITC)進行了優化,Cy3的,和DII,當單獨或多重標記技術被用於他們,並且還建議與紅色熒光蛋白的使用( 紅色熒光蛋白 )。帶通發射濾波器功能,以減少或消除從熒光團發射的深紅色或近紅外光譜區的幹擾。相比,可以在這些應用(如Cy3的集合)中使用的一些其它濾波器組合,所述的G-2E / C組合產生視覺上更紅的圖像,由於發射的帶通(590納米)的相對高的低波長的限製,不包括大部分的黃色信號。 更高波長帶通的附加效果是降低了羅丹明類熒光成像時采集到的信號的總水平。吖啶紅,Alexa的熒光劑(546,555,和568),茜素紅,BODIPY探頭,鈣橙,Cy3的,DiI標記,DiIC16,DiIC18,溴化乙錠,NeuroTrace:學習以下熒光團時,G-2E / C套推薦六百一十五分之五百三,碘化丙啶,派洛寧B,RedoxSensor紅CC-1,羅丹明衍生物,塞夫龍河豔紅和TRITC。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置吸收綠光的熒光探針的這種過濾器組合的性能。

一對女兒鼠袋鼠(PTK2)上皮細胞,示於圖2(a)中,分別為在那些在培養被免疫熒光標記的同隨後綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體到的Alexa Fluor 546的吸收最大值的Alexa Fluor 546的是556納米,並且最大發射發生在573納米(在可見光光譜的黃色區域)。需要注意的是在整個細胞質中延伸的細胞內微管網絡的突出黃橙色染色。奧林巴斯顯微鏡

呈現在圖2(b)是從沾滿MitoTracker紅CMXRos,它的目標細胞內的線粒體的網絡牛肺動脈內皮細胞培養的熒光發射強度。最大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米,並且最大發射發生在599納米。另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和BODIPY FL-phallacidin(靶向肌動蛋白;綠色發光)。注意沒有信號從藍色(DAPI)和綠(BODIPY)熒光團,但明亮的橙紅色熒光被管狀線粒體發揮。

由薄小鼠腎髒的部分沾上多個(3)的熒光團的熒光發射強度被證明在如圖2(c)。在組織切片細胞核靶向與核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358納米,並且具有發射最大值在461納米。 另外,低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素(腎小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。注意沒有信號的同時從藍色(DAPI)和綠(的Alexa Fluor 488)探針,但強烈的橙紅色熒光因的Alexa Fluor 568中的肌動蛋白和刷狀緣的網絡的存在。

是HeLa細胞即人免疫熒光標記的同隨後綴合的Alexa Fluor 546山羊抗-小鼠Fab片段初級抗組蛋白(鍋)的小鼠單克隆抗體,圖2(D)中示出。 第一抗體,從HeLa細胞的純化核級分生產,特異性結合的抗原決定簇,其存在於所有五個組蛋白(H1,H2A,H2B,H3和H4)。 相同的探針(的Alexa Fluor 546,但共軛毒傘素到)被用來從非洲綠猴腎細胞(COS-1)在圖2(E)標記的細胞的肌動蛋白。該細胞係不顯示顯著的微絲通常見於許多上皮培養物,如印度麂,HeLa細胞,和PTK2,而是形成小的原纖維具有更光滑的外觀。

從棕櫚樹( 篦齒蘇鐵 )microsporophyll薄款自發熒光發光強度呈現在圖2(F)。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。在綠色激發區域,葉綠素具有吸收帶具有低消光係數,但仍然產生熒光的檢測水平在550納米的發射波長和上述(綠色,黃色,橙色和紅色)。 為棕櫚樹組織,注意自發熒光發射強度中的橙色和紅色光譜區域的存在,這是強烈讓人想起暗視場圖像的。



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