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尼康顯微鏡藍色激發塊B-3A(長波輻射)

2018-03-29  發布者:admin 

尼康的B-3A熒光濾波器組配有一個很寬的激發帶通範圍(70納米),可提供寬得多的吸收窗比任何在藍色激勵係列中的其他組合。 紫外,可見和近紅外透射此長通發射濾波器組合頻譜剖麵,在圖1下圖所示的寬激發帶使濾波器組與鹵鎢燈照射可以采用,雖然它也與電弧放電有用調查有非常微弱的信號探頭時燈。 所述長通屏障(發射)濾波器具有520納米的截止波長,並且能夠從綠色,黃色,橙色和紅色熒光團具有在藍色波長區域的吸收帶傳送顯著量的信號的。 類似此類中的其他過濾器的組合,在B-3A具有長通雙色鏡切,在505納米的波長。

藍色激發濾光片座B-3A規格:

  • 激發波長篩選:420-490納米(帶通,455 CWL)

  • 雙色鏡截止波長:505納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長:520納米截止點(長通,LP)

包含在B-3A組合的長通發射濾波器透射比任何 E -係列過濾器集顯著更多的信號,並且比得上在藍色激勵類的其他長通(B-1AB-2A)的組合(具有異常顯示高得多的噪聲電平的)。該組的目的是使采用鎢 - 鹵素燈照明用於激發在藍色光譜區的熒光,並采用一個二色鏡,用於在綠色,黃色,橙色發射的熒光發射進行了優化,和紅色區域。 在505納米的二色鏡截止波長加上長通屏障過濾器(切上的520納米波長)是類似的其他藍激發濾光片組合。

B 3A濾波器集合產生的圖像是非常明亮的(特別是與電弧放電照明),但有一個顯著低信噪比比得到利用帶通發射濾波器濾波的圖像。 其結果是,背景區域是比那些從帶通發射濾波器打火機,或在某些情況下,從其他長通濾波器的組合(取決於照明源和其它因素)。 在綠色,黃色,橙色,和紅色區域的熒光發射是在利用B-3A濾波器組合采集到的圖像經常可見(參見圖2)。 吖啶橙,吖啶紅,將Alexa Fluor 430的Alexa Fluor 488,葉綠素(自發熒光),熒光探針,LysoTracker衍生物,膦,阿的芥末,塞夫龍河探頭和四環素:調查以下熒光團時,這套建議。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置藍色吸收熒光探針的這種過濾器組合的性能。 在一般情況下,用B-3A濾波器組合而生成的圖像顯示出比與其它的藍色激發套觀察多得多的背景信號。

示於圖2(a)是從大鼠袋鼠的培養(PTK2)上皮細胞進行免疫熒光標記的同隨後綴合的Alexa Fluor山羊抗-小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發射強度488.最大吸收的Alexa Fluor 488的是495納米,並且最大發射發生在519納米。 需要注意的是在整個細胞質中並進入兩個子細胞之間的中間體延伸的細胞內微管網絡的突出染色。 另外,將試樣同時染色核蛋白質CDC6(偶聯至太平洋藍),以及用於F-肌動蛋白與鬼筆環肽從藍色綴合的Alexa Fluor 568注缺席信號(太平洋藍)的熒光團,這是不有效地激發在該波長區域。然而,來自紅色熒光探針顯著量信號(的Alexa Fluor 568)所用的皮層中觀察到。(奧林巴斯顯微鏡)

由薄小鼠腎髒的部分標記與多個(3)的熒光團的熒光發射被示出在圖2(b)。 在組織切片細胞核靶向與核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358納米,並且具有發射最大值在461納米。 另外,低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素(腎小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。 注意沒有信號從藍色(DAPI)熒光團,但紅色的顯著水平(的Alexa Fluor 568)熒光滲出通過在圖像的許多區域。

圖2(c)和圖2(e)描繪的中國麂皮鹿皮標記的Alexa Fluor 488(圖2的(c))和SYTOX綠(圖2(e))的成纖維細胞。 將細胞在如圖2(c)中免疫熒光標記的同隨後綴合的Alexa Fluor山羊抗-小鼠Fab片段初級抗OXPHOS複合V抑製蛋白的單克隆抗體(鼠)488.此外,將試樣同時染色F-肌動蛋白的Alexa Fluor 350(藍色)綴合到鬼筆環肽,並用於DNA與SYTOX橙。 注意信號的同時從橙色和綠色熒光團,但不存在任何顯著發光強度從的Alexa Fluor 350,這是不能有效地激發的藍色波長區域的存在。 在許多情況下,SYTOX橙染色多種除了DNA的細胞質的元素,如在圖像中是顯而易見的。

SYTOX綠被用來染色的染色質在圖2(E)顯示的細胞的細胞核。 最大吸收的SYTOX Green是504納米,並且最大發射發生在523納米。 另外,將試樣同時標記與初級抗人氧化磷酸化複合物V抑製蛋白的小鼠單克隆隨後偶聯於太平洋藍(最大吸收在410納米)的山羊抗小鼠Fab片段的抗體。 肌動蛋白細胞骨架網絡也被標記鬼筆環肽綴合的Alexa Fluor 568注高信號電平的存在下從紅色(的Alexa Fluor 568)的熒光團,但是從太平洋藍,非常弱的熒光發射強度是不能有效地激勵這光譜區域。

由薄蕨類根莖部分自發熒光發射強度( 全緣貫眾 )組織示於圖2(f)所示。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。 在藍色區域,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與420和460納米之間的波長激發。 注意頻譜滲出通過從自體熒光發射在黃色和紅色光譜區域用B-3A濾波器組合的存在。



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