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尼康顯微鏡雙頻激發塊FITC-TRITC

2018-03-28  發布者:admin 

紫外線和尼康雙波段激發和發射的FITC-TRITC濾波器組合可見光透射光譜曲線下麵示於圖1.該過濾器組被設計用於傳統的異硫氰酸熒光素的最佳檢測素(FITC)及四甲基羅丹明異硫氰酸酯(TRITC)探針組合,以及其它熒光團具有類似的吸收光譜和發射光譜。 雙激發幹涉濾波器集成了一個激發濾光器具有窄通帶的窗口,在藍(475至490納米),綠色(540至565納米)的頻譜區。 雙發射(屏障)濾波器的帶通區域能夠同時從兩個熒光檢測的綠色和橙紅色的發射。 傳輸和每個過濾器的反射帶,並且應用具有選擇為互補的發射和激發波長的兩個帶通透射區域(多色)一個二色鏡之間的尖銳過渡,允許雙波段信號檢測以最小的幹擾。

雙激發濾波器模塊FITC-TRITC產品規格:

  • 激發波長篩選:475-490納米(帶通,483 CWL)和540-565納米(帶通,553 CWL)

  • 多色鏡波長:500-540納米(帶通)和575-660納米(帶通)

  • 屏障過濾波長:503-530納米(帶通,517 CWL)和580-620納米(帶通,600 CWL)

FITC-TRITC雙波段熒光濾波器組合被用於同時檢測的熒光染料FITC和TRITC與頻帶之間的最小串擾的專門設計的,並且可以與其他對具有相似光譜分布的熒光探針的使用。 當試樣被照亮用水銀弧光放電燈中,546納米線是理想的TRITC激發。 過濾器設置的較短波長信道將選擇狹義的光譜區域為藍色激發和綠色發光檢測,而較長的波長成分對應綠色激發和橙紅色發光檢測。 研究以下的熒光團的各種組合時,此濾波器組建議:FITC,綠色熒光蛋白(GFPEGFP),的Cy2,或的Alexa Fluor 488(藍色激發),配對TRITC,Cy3的紅色熒光蛋白(DsRed ),或的Alexa Fluor 546和568(綠色激發)。 在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置的熒光探針對這個濾波器組合的性能。

如圖2(a)是從染色的MitoTracker紅CMXRos和BODIPY FL phallacidin牛肺動脈血管內皮細胞,其靶向細胞內的線粒體的網絡和細胞骨架的肌動蛋白絲,分別培養的熒光發射強度。 最大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米,並且最大發射發生在599納米,而對於BODIPY FL的相應值是503和512納米。 另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)。 注意沒有來自藍色(DAPI)熒光信號,但明亮的橙黃色熒光由管狀線粒體展出,並從肌動蛋白絲在細胞質中的綠色發光。

小鼠腸的薄膜部沾上Alexa Fluor 350麥胚凝集素,藍色熒光的凝集素特定於杯狀細胞的粘液示於圖2(b)。 另外,將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白; 600納米發射)和SYTOX綠(核; 504納米激發和523納米發射)。 請注意沒有從藍色熒光(Alexa Fluor 350)的信號,但在核組織標本,由於SYTOX綠色的明亮的綠色熒光,和肌動蛋白的刷狀緣的橙紅色熒光。奧林巴斯顯微鏡

如圖2(c)展示了在中國倉鼠卵巢(CHO線),該轉染含有互補DNA到THY-1,駐留在高爾基體小糖蛋白的增強型綠色熒光蛋白(EGFP)載體的細胞的培養熒光發射。 該細胞係表達了主要定位於高爾基體,而且也分布到囊泡整個細胞質EGFP-THY-1的嵌合蛋白質。 將試樣標有一些額外的探頭,包括MitoTracker紅CMXRos(針對線粒體;紅色熒光)和DAPI(針對核;藍色熒光)。 注意在包圍核,這是缺乏的藍色熒光從DAPI與該過濾器相結合的區域的高爾基體的突出綠色染色。 在細胞質囊泡還呈現綠色熒光,但在較小的程度比見於高爾基。 此外,從MitoTracker染料而產生的橙紅色熒光是在線粒體網絡清晰可見。

熒光薄小鼠腎髒的部分沾上多個(3)的熒光團是在圖2(d)所示。 在組織切片細胞核靶向與核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358納米,並且具有發射最大值在461納米。 另外,低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素(腎小球和曲小管; 519納米發射)和Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。注意信號的同時從綠色(Alexa Fluor 488)和紅色(Alexa Fluor 568)的探針,但由於沒有藍色熒光由於DAPI,這是由該過濾器組合抑製的存在。

牛肺動脈血管內皮細胞的培養即進行免疫熒光標記的同隨後山羊綴合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體,圖2(e)中示出。 將細胞培養物同時沾上德克薩斯紅鬼筆環肽和DAPI,靶向的細胞骨架肌動蛋白網絡和DNA在細胞核中,分別。 最大吸收BODIPY FL的是505納米,並且最大發射發生在513納米,而對於德克薩斯紅的相應值是595和620納米。 注意沒有來自藍色(DAPI)熒光信號,但明亮的紅色熒光通過在細胞質的肌動蛋白絲,並從微管網絡的綠色發射表現。

從石鬆球果( 伸筋草 )自發熒光發射強度薄部分體現在圖2(F)。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。 在藍色和綠色的激發區域,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與450和550納米之間的波長激發。 對於以上所示的球杆苔蘚組織,注意自發熒光發射強度中的綠色和紅色光譜區域的存在,這是尼康FITC-TRITC熒光濾波器組合的特性。



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