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新聞資訊

尼康顯微鏡藍紫色激發塊CFP(帶通)

2018-03-28  發布者:admin 

高性能尼康CFP(青色熒光蛋白)濾波器的組合通過采用帶通發射濾波器,其40納米的通帶(460-500納米)限製檢測到的熒光發射在不同於藍紫組中的其他三個補青藍光譜區域。 紫外,可見和近紅外透射該濾波器組的頻譜輪廓下麵示於圖1,一種窄的20納米的激發最小化通帶和自發熒光是為了避免通常用於雙標記實驗中使用的青色結合某些熒光染料的激發熒光蛋白。 雖然主要設計用於熒光蛋白的成像,此帶通發射組合是用於獲得具有多個標簽標本圖像時熒光團中的一個是有效地激發,在藍紫色光譜區域是有用的。

藍紫色激發濾光片座CFP規格:

  • 激發波長篩選:426-446納米(帶通,436 CWL)

  • 雙色鏡截止波長:455納米(長通,LP)

  • 屏障過濾波長:460-500納米(帶通,480 CWL)

CFP熒光濾波器集合被設計以獲得最佳性能與由藍紫色波長激發青色熒光蛋白,特別是當用於在組合的雙標記技術具有增強的黃色熒光蛋白利用。 雖然最初設計為從蛋白質的熒光團檢測發射,該過濾器組合實質上是一種帶通發射藍紫激發集,並且可以被用於檢查一個寬的吸收光在此光譜區域的標本光譜。

CFP組合的激發帶通一般不激發黃色熒光蛋白(激發在513納米),並通過采用帶通發射濾波器,黃色熒光被排除的檢測時在CFP濾波器集合被使用。 應當指出的是,從增強型綠色熒光蛋白的一些信號可能與此濾波器集合檢測到,並且因此該熒光是不是一個好的候選為與青色蛋白質變體的雙標記。 在濾波CFP組合建議研究以下熒光團時:ACMA,吖啶同型二聚體,Astrazon黃色,Atabrine,兒茶酚胺,CFP,色黴素A,Genacryl嫩黃,Genacryl黃色,塞夫龍河黃色,SYTO 42(43,44,45),和SYTOX藍色。 在圖2中呈現的圖像表明該過濾器組合的性能與各種定位於不同的細胞內位置藍紫吸收熒光探針。

示於圖2(a)是從大鼠胸主動脈(肌肉)的細胞進行免疫熒光標記的同隨後綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級抗OXPHOS複合V抑製蛋白的單克隆抗體(小鼠)的培養的熒光發射強度太平洋藍。 最大吸收太平洋藍的是410納米,並且最大發射發生在455納米。 另外,將試樣同時染色綴合鬼筆環肽F-肌動蛋白的Alexa Fluor 488(綠色),以及用於DNA與SYTOX橙。 注意沒有信號的同時從橙色和綠色熒光團(SYTOX定位於細胞核會出現這些觀察條件下綠色)。 在許多情況下,SYTOX橙染色多種除了DNA的細胞質的元素,盡管這不是顯而易見的圖像中。奧林巴斯顯微鏡

圖2(b)展示了從大鼠骨骼肌組織細胞(L6細胞係;成肌細胞)的培養熒光發射該被免疫熒光標記與綴合到Alexa的初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體,隨後用山羊抗小鼠Fab片段氟430.最大吸收的Alexa Fluor 430的是431納米,並且最大發射發生在541納米。 雖然細胞內微管網絡使用這個協議重染色,在CFP組合帶通濾波器不通過大量的熒光發射的來自的Alexa Fluor 430,並產生隻有微弱的信號被集中靠近核。 另外,將試樣同時染色F-肌動蛋白的Alexa Fluor 488綴合鬼筆環肽,以及用於線粒體與MitoTracker紅CMXRos。 注意沒有信號從紅色(MitoTracker)和綠色(Alexa Fluor 488)的熒光團。

從DAPI染色,它的目標在細胞核DNA牛肺動脈內皮細胞培養熒光發射強度,是在圖2(c)所示。 最大吸收的DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)為358納米,並且當熒光被綁定到DNA中的最大發射發生在461納米。 另外,將試樣同時沾上BODIPY FL phallacidin(靶向肌動蛋白;綠色發光)和MitoTracker紅CMXRos(靶向線粒體;紅色發光)。 注意沒有信號從紅色(MitoTracker)熒光團,但滲出通過從綠色(BODIPY FL)探針,其顯示為圍繞原子核的弱青色信號。 此外,核出現那麽激烈,用熒光發射移位到較長波長比可比的圖像與尼康紫羅蘭和紫外線濾光片組合。

原子核中的小鼠腎薄組織切片(圖2(d))的進行了針對性的核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358納米和發射最大值在461納米。 此外,在圖2(d)該低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素(腎小球和曲小管)和Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。 注意沒有信號從紅色(的Alexa Fluor 568)的熒光團,但顯著量滲透入來自綠色(的Alexa Fluor 488)探針青色發射濾光片。 用紫外線激發帶通發射濾光片組,在試樣的暗核會出現明亮的藍色和的Alexa Fluor 488信號將基本上不存在。

圖2(e)表示從大鼠袋鼠腎上皮細胞(PTK2線路)進行免疫熒光標記與初級抗細胞角蛋白(一種中間絲蛋白)的小鼠單克隆抗體的培養,隨後用綴合的山羊抗小鼠Fab片段的發光強度濱海藍色。 最大吸收碼頭藍的是365納米,並且最大發射發生在460納米。 另外,將試樣同時染色線粒體與MitoTracker紅CMXRos。 注意沒有信號從紅色熒光團與該帶通發射濾波器的組合。 還應當指出,在與在CFP濾波器集合較弱信號的缺乏,在藍紫色區域的結果顯著吸收匡藍的。

由薄蕨類球果部分自發熒光發射強度( 全緣貫眾 )組織表現出如圖2(f)所示。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括木質素,葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。在藍紫色區域中,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與400和440納米之間的波長激發。 注意沒有光譜滲出通過從自體熒光發射在綠色和紅色光譜區域與CFP濾波器組合。




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