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尼康顯微鏡三頻激發塊DAPI-FITC-TRITC

2018-03-28  發布者:admin 

紫外線和尼康DAPI-FITC-TRITC濾波器組合可見光透射光譜曲線下麵示於圖1.該濾波器集合時在施加設計的DAPI,FITC(異硫氰酸熒光素),和TRITC(四甲基異硫氰酸酯)探針的最佳檢測組合,並采用一個激發濾光器與窄帶通窗中的紫外線(385至400納米),藍色(475〜490納米),綠(545至565納米)的頻譜區。

三發射(阻擋)濾波器的帶通區域允許檢測的藍,綠,和橙紅色發射從最多同時3熒光染料透射和反射帶的每一個過濾器,並應用具有選擇為互補的發射和激發波長的多個帶通透射區域一個二色鏡之間的尖銳過渡,使三頻帶信號檢測以最小的交叉,幹擾和噪聲。

三重激發濾波器模塊DAPI-FITC-TRITC產品規格:

  • 激發波長篩選:385-400納米(帶通,393 CWL),475-490納米(帶通,483 CWL)和545-565納米(帶通,555 CWL)

  • 二色鏡波長:435-470納米(帶通),500-540毫微米(帶通),和570-645納米(帶通)

  • 屏障過濾波長:450-465納米(帶通,458 CWL),505-535納米(帶通,520 CWL)和580-620納米(帶通,600 CWL)

DAPI-FITC-TRITC三重帶熒光濾波器組合被用於同時檢測所述熒光染料DAPI,FITC和TRITC具有最小交叉的專門設計(光譜泄放通)相鄰帶之間,並且它也可以與熒光的其它組合采用具有類似的光譜曲線探針。 濾波器組的短波長信號的信道將選擇狹義的光譜區為紫色激發和藍色發光檢測; 第二,波長較長的信道對應於藍色激發綠色發光檢測,以及綠色激發耦合到橙紅色發射構成濾波器集合的第三頻帶。 短波長激發傳輸的大小,以提供藍色發光的更好的平衡與其他熒光信號,同時也盡量減少漂白刻意降低。 研究從以下三組選擇熒光團的各種組合時,此濾波器組建議:DAPI,藍色熒光蛋白(BFP)或Hoechst 染料(紫色激發);FITC,綠色熒光蛋白(GFP),的Cy2,或Alexa Fluor 488(藍色激發); TRITC,紅色熒光蛋白,Cy3的,將Alexa Fluor 546,或美圖跟蹤紅CMXRos(綠色激發)。 在圖2中呈現的圖像表明該過濾器設置有多種針對不同細胞內位置的熒光探針組合的性能。

圖2(a)所示的熒光發射從沾有MitoTracker紅CMXRos,將Alexa Fluor 488共軛鬼筆環肽和DAPI人骨肉瘤細胞(U-2線),其中針對細胞內的線粒體的網絡,細胞骨架肌動蛋白絲的文化,核上。 的可見光最大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米,並且最大發射發生在599納米,而對於將Alexa Fluor 488的相應的值是495和519納米。 注意在這四個子細胞,其清楚地表明通過高信號電平的所有三個用於染色的樣品中的熒光團的存在顯著的對稱性。

大鼠的皮膚組織的一個薄的部分染色DNA和糖蛋白用DAPI和四甲基羅丹明(TMR)綴合到小麥胚芽凝集素,分別示於圖2(b)。 紫外光吸收最大值的DAPI的是358納米,並且在可見光發射最大值發生在461納米,而對於TMR相應值是550和573納米。 另外,將試樣同時標記的Alexa Fluor 488綴合至鬼筆環肽(靶向肌動蛋白網絡;綠色發光)。 注意兩個重疊和離散信號的來自所有三個這些熒光團的存在。(奧林巴斯顯微鏡)

從牛肺動脈血管內皮細胞的培養物被認為免疫熒光標記的同隨後山羊綴合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發射強度在圖2(c)所示。 將細胞培養物同時沾上德克薩斯紅鬼筆環肽和DAPI,靶向的細胞骨架肌動蛋白網絡和DNA在細胞核中,分別。 可見光最大吸收的BODIPY FL的是505納米,並且最大發射發生在513納米,而對於德克薩斯紅的相應值是595和620納米。

精選於圖2(d)是一個薄的小鼠腸沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素,藍色熒光的凝集素特定於杯狀細胞的粘液部分。 另外,將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白; 600納米發射)和SYTOX綠(核; 504納米激發和523納米發射)。 注意信號從藍色熒光團(Alexa Fluor 350)的存在下,以及作為核在組織標本由於SYTOX綠的明亮的綠色熒光,並且橙紅色熒光(Alexa Fluor 568)從肌動蛋白絲在刷邊框。

沾有MitoTracker紅CMXRos和Alexa Fluor 488綴合鬼筆環肽正常人肺成纖維細胞(MRC-5線),其靶向細胞內的線粒體的網絡和細胞骨架的肌動蛋白絲,分別示於圖2(e)所示。 另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;紫外線激發的藍色發光)。 注意相對平衡,高信號電平的所有三個用於染色的樣品中的熒光團的存在。

由薄麥粒的截麵自發熒光發射強度( 小麥 )的組織中演示了圖2(f)所示。 在植物組織中的內源性的自發熒光產生於各種生物分子,包括木質素,葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。 在藍色和綠色的激發區域,葉綠素具有吸收帶,具有高消光係數,並產生一個顯著量熒光在與450和550納米之間的波長激發。 其他的內源性熒光團通過紫外線與該過濾器組合激發。 對於以上所示的麥粒組織,注意自發熒光發射強度中的藍,綠,和紅光譜區域的存在,這是尼康DAPI-FITC-TRITC熒光濾波器組合的特性。



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