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新聞資訊

尼康顯微鏡熒光蛋白組合濾光片的選擇

2018-03-28  發布者:admin 

設計成圖像的熒光蛋白的熒光濾光片組合,必須仔細選擇,以最大限度地提高發光強度的呈現給檢測器,同時減少了從自體熒光或放氣通過其它熒光團不希望的光子數的水平。 大多數熒光蛋白表現出寬的吸收和發射光譜圖提供廣泛的選擇在過濾器,其通常與特定的檢測係統(人眼,數碼相機,或光電倍增管)的使用進行了優化。 這個交互式教程旨在使臨界濾波器參數,包括中心波長,帶寬區域的識別,以及二色鏡截止波長,這是必要的成象熒光蛋白質。


教程初始化與增強型綠色熒光蛋白(EGFP)出現在光譜曲線窗口疊加在一個汞弧光放電燈的發射光譜的歸一化的吸收和熒光發射光譜圖。 還包括在初始化時該窗口是切割的二色鏡(分束器)的信息的波長適合於熒光團,以及用於激發濾波帶寬發射濾波器帶寬型材建議起點。 鼠標光標可用於拖動沿著譜概況窗口的波長軸灰度帶寬的邊界來確定最佳位置。 上為每個濾波器的控製的右手側的雙滑塊組合或箭頭按鈕可以用來調整帶寬,中心波長可以使用左手箭頭按鈕來改變。 拖動左側滾動條也意味著整個圖形帶寬輪廓,同時拖動右側滑塊將增加或減少帶寬大小。 目前中心波長和帶寬的虛擬激發和發射濾光片被不斷更新和在紅色標號上述滑塊顯示。奧林巴斯顯微鏡

二色鏡滑塊控製該元件的截止波長曲線的位置,並且可以打開或關閉使用相鄰滑塊的複選框進行切換。 激發和發射濾波器帶寬顯示器也可以通過除去複選標記禁用。 同樣地,在水銀燈的光譜輪廓可以通過停用所附複選框被關閉。 默認汞弧燈)吸收抗體 (Ab)和發射器(EM)光譜曲線可以通過從上方的照明源頭黃色顯示窗的框刪除複選標記被禁用。 當激光源從照明下拉菜單選擇,基於在激光波長處的摩爾消光係數的激勵效率百分比顯示在照明顯示窗口上方的綠色框。 激光線,繪製顏色近似的光譜概要窗口的波長,可以通過禁用所述激光線複選框被停用。 為了保持當前的教程的參數(顯示激發和發射濾光器配置文件等),同時,通過探針或照明源列表切換,在維護狀態複選框可以啟用。 新的熒光蛋白類可以使用組單選按鈕的光譜曲線窗口的右側可以選擇一起選擇一個探頭下拉菜單。

熒光蛋白過濾組合屬性

蛋白質
  (
縮寫)

激發激光
  (nm)

激發濾光片
  CWL / BW (nm)

二色鏡
  Cut-On (nm)

發射濾光片
  CWL / BW (nm)

相對亮度
  (% of EGFP)


GFP (wt)

Argon (488)

450/50

480LP

510/50

48


綠色熒光蛋白

EGFP

Argon (488)

470/40

495LP

515/30

100


Emerald

Argon (488)

470/40

495LP

515/30

116


Azami Green

Argon (488)

470/40

495LP

520/30

121


CopGFP

Argon (488)

470/40

490LP

510/30

125


AcGFP

Argon (488)

470/40

490LP

510/30

82


ZsGreen

Argon (488)

470/30

495LP

520/40

117


藍色熒光蛋白

EBFP

Diode (405)

375/50

405LP

445/50

27


Sapphire

Diode (405)

400/50

460LP

515/50

55


T-Sapphire

Diode (405)

400/50

460LP

515/50

79


青色熒光蛋白

AmCyan1

Argon (457)

440/40

470LP

500/40

31


ECFP

Diode (440)

435/40

460LP

495/50

39


Cerulean

Diode (440)

435/40

460LP

500/50

79


CoralHue Cyan

Argon (488)

450/50

480LP

505/35

73


黃色熒光蛋白

EYFP

Argon (514)

490/40

515LP

540/30

151


PhiYFP

Argon (514)

500/45

525LP

555/40

155


Citrine

Argon (514)

500/25

515LP

545/40

174


Venus

Argon (514)

495/35

515LP

545/40

156


ZsYellow1

He-Ne (543)

500/45

525LP

555/40

25


橙色和紅色熒光蛋白

CoralHue Orange

He-Ne (543)

525/40

550LP

580/40

92


mOrange

He-Ne (543)

525/40

550LP

585/50

146


DsRed

He-Ne (543)

540/45

570LP

600/50

176


DsRed2

He-Ne (543)

540/50

570LP

600/40

72


DsRed-Express

He-Ne (543)

540/45

570LP

600/50

58


mTangerine

Kr-Ar (568)

545/40

570LP

600/40

34


mStrawberry

Kr-Ar (568)

550/50

580LP

615/50

78


AsRed2

Kr-Ar (568)

540/40

575LP

620/60

8


mRFP1

He-Ne (594)

560/55

590LP

630/60

37


mCherry

He-Ne (594)

560/55

590LP

630/60

47


HcRed1

He-Ne (594)

560/60

595LP

630/50

1


mRaspberry

He-Ne (594)

570/60

605LP

645/60

38


HcRed-Tandem

He-Ne (594)

570/70

610LP

650/60

19


mPlum

He-Ne (594)

570/60

605LP

650/60

12


光學熒光筆熒光蛋白; (N) = Native (P) = Photoconverted

PA-GFP (N)

Diode (405)

400/60

465LP

530/50

8


PA-GFP (P)

Argon (488)

480/40

505LP

535/40

41


PS-CFP (N)

Diode (405)

395/50

430LP

470/60

16


PS-CFP (P)

Argon (488)

470/50

500LP

530/40

15


PS-CFP2 (N)

Diode (405)

395/50

430LP

470/60

26


PS-CFP2 (P)

Argon (488)

470/50

500LP

530/40

32


Kaede (N)

Argon (488)

485/40

510LP

535/30

259


Kaede (P)

Kr-Ar (568)

540/50

570LP

590/30

59


mEosFP (N)

Argon (488)

490/30

510LP

535/30

128


mEosFP (P)

Kr-Ar (568)

540/50

570LP

600/40

68


Kindling (N/P)

Kr-Ar (568)

560/50

590LP

625/50

12


Dronpa (P)

Argon (488)

485/30

505LP

530/30

240


表1


表1是由幾個最流行和可能有用的熒光蛋白變體的顯示屬性的匯編。 隨著通用名稱和/或縮寫為每個熒光蛋白,最佳激光波長線,以及用於激發和發射濾波器帶寬和中心波長建議起點被列出。 也包括在表中的相對亮度和推薦的二色鏡的參數。 所計算的亮度值來源於摩爾消光係數和量子產率的產物,通過用EGFP的值除以。 該列表由科學和商業文獻資源創建,不是為了全麵,而是代表已經受到相當重視的文學和可能有助於研究工作的寶貴熒光蛋白的衍生物。

在計算本教程的值所使用的吸收和熒光光譜記錄在受控條件下被歸為比較隻是和顯示的目的。在實際熒光顯微鏡調查,光譜曲線可能會因環境的影響,如pH,離子濃度,溶劑的極性,以及在局部探針濃度的波動而變化,並且因此,可能不同於實驗條件下實際觀察到。




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